[發明專利]一種硫酸軟骨素的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010550758.8
• 申請日: 2020-06-16
• 公開（公告）號: CN111471120B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 王秋音;趙健;王光音
• 申請（專利權）人: 北京赫爾默技術有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08;A61K31/737;A61P9/10
• 代理公司: 北京沁優知識產權代理有限公司 11684
• 代理人: 郭峰

本發明提供了一種硫酸軟骨素的制備方法，所述硫酸軟骨素的制備方法包括以下步驟：預處理；第一次提取；第二次提??；第一次超濾濃縮；第一次醇沉；醇洗脫水。本發明還提供了一種上述硫酸軟骨素在制備動脈粥樣硬化疾病藥物中的應用。本發明能夠高效進行硫酸軟骨素的制備工作，以酶解法為主，并輔以超聲波振動手段，促進酶解過程的啟動以及提高了酶解過程中的酶活，顯著的提高硫酸軟骨素的生產效率，且能夠有效促進硫酸軟骨素與聚集蛋白糖糖鏈上的相連接核心蛋白質的糖苷鍵斷裂，并對酶解所產生的多肽鏈及雜質蛋白進行針對性的水解，能夠有效降低產物中的蛋白質殘留問題，顯著提高所得成品硫酸軟骨素的純度。

技術領域：

本發明涉及醫藥制備技術領域，尤其涉及一種硫酸軟骨素的制備方法及其應用。

背景技術：

硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate，CS)是一種黏多糖，吸水性較強，多呈白色粉末狀，易吸濕，易溶于水，不不溶于乙醇、氯仿、丙酮等有機溶劑，廣泛分布于人和一些動物如豬、牛、羊、魚等的身體組織中，尤其是動物的軟骨組織，如喉骨、鼻中骨、氣管等，能夠廣泛應用于神經性頭痛、神經痛、關節痛、偏頭痛、動脈硬化癥等癥狀，也可用于鏈霉素引起的聽覺障礙及肝炎等癥狀的輔助治療。

現有技術中，多采用酶解法或堿提酶解法提取硫酸軟骨素，經過乙醇沉淀得到硫酸軟骨素粗品。隨著硫酸軟骨素市場的不斷成熟，對硫酸軟骨素質量的要求也在進一步提高，目前的技術中，通常采用氧化水解法、乙醇分級沉淀法、等電點法、樹脂吸附法等方法對制得的粗品進行精化提純，以滿足市場的需求，但是采用上述分布生產的方式，較為繁瑣，不利于形成工業化的大規模生產，生產周期較長，成本較高，且生產成品中以蛋白質為主的雜質較多，通常無法將成品中的蛋白質下降至5％以下。

因此，本領域亟需一種硫酸軟骨素的制備方法及其應用。

有鑒于此，提出本發明。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種能夠更好使用硫酸軟骨素的制備方法及應用，以解決現有技術中的至少一項技術問題。

具體的，本發明的第一方面，提供了一種硫酸軟骨素的制備方法，所述硫酸軟骨素的制備方法包括以下步驟：

預處理：將軟骨原料加去離子水浸沒并蒸煮，去除軟骨表層附著的肌肉組織及油脂，蒸煮溫度為50-60℃，蒸煮時長為12-18小時，并將蒸煮后的軟骨原料使用粉碎機粉碎；

第一次提?。簩㈩A處理步驟后的軟骨原料轉移至超聲波萃取器中，用去離子水浸沒并加入按溶液體積計3％的氯化鈉，使用氫氧化鈉水溶液調節溶液pH為8-9，升溫至40-60℃，加入按軟骨重量計0.2-0.8％的復合酶，加入按溶液體積計0.1-0.2％有機緩沖液，維持溶液 pH8-9，保溫40-60℃，在頻率20000HZ的超聲波條件下振動60-90分鐘，收集提取液；

第二次提取：用去離子水浸沒第一次提取步驟后的軟骨原料，加入按溶液體積計3％的氯化鈉，使用氫氧化鈉水溶液調節溶液pH為8-9，升溫至40-60℃，加入按軟骨重量計0.1-0.4％的單酶，加入按溶液體積計0.1-0.2％有機緩沖液，維持溶液pH8-9，保溫50-60℃，在頻率 15000HZ的超聲波條件下振動30-60分鐘，收集提取液；

第一次超濾濃縮：將第一次提取及第二次提取步驟所得提取液混合，使用2000-3000分子量的超濾膜濃縮，得到濃縮液；

第一次醇沉：將第一次超濾濃縮步驟所得的濃縮液，使用氫氧化鈉水溶液調節溶液pH 為6-7，加入按溶液體積計3％的氯化鈉，再加入乙醇，使溶液乙醇濃度達到60-70％，收集沉淀物；

醇洗脫水：將第一次醇沉步驟所得的沉淀物，使用80％濃度的乙醇水溶液洗滌后，使用 95％濃度的乙醇水溶液脫水，干燥后得到成品硫酸軟骨素；