[發(fā)明專利]一種硫酸軟骨素的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010550758.8
• 申請(qǐng)日: 2020-06-16
• 公開（公告）號(hào): CN111471120B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王秋音;趙健;王光音
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京赫爾默技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C08B37/08
• 分類號(hào): C08B37/08;A61K31/737;A61P9/10
• 代理公司: 北京沁優(yōu)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11684
• 代理人: 郭峰

1.一種硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述硫酸軟骨素的制備方法包括以下步驟：

預(yù)處理：將軟骨原料加去離子水浸沒并蒸煮，去除軟骨表層附著的肌肉組織及油脂，蒸煮溫度為50-60℃，蒸煮時(shí)長(zhǎng)為12-18小時(shí)，并將蒸煮后的軟骨原料粉碎；

第一次提取：將預(yù)處理步驟后的軟骨原料轉(zhuǎn)移至超聲波萃取器中，用去離子水浸沒并加入按溶液體積計(jì)3%的氯化鈉，使用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)溶液pH為8-9，升溫至40-60℃，加入按軟骨重量計(jì)0.2-0.8%的復(fù)合酶，加入按溶液體積計(jì)0.1-0.2%有機(jī)緩沖液，維持溶液pH8-9，保溫40-60℃，在頻率20000HZ的超聲波條件下振動(dòng)60-90分鐘，收集提取液；

第二次提取：用去離子水浸沒第一次提取步驟后的軟骨原料，加入按溶液體積計(jì)3%的氯化鈉，使用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)溶液pH為8-9，升溫至40-60℃，加入按軟骨重量計(jì)0.1-0.4%的單酶，加入按溶液體積計(jì)0.1-0.2%有機(jī)緩沖液，維持溶液pH8-9，保溫50-60℃，在頻率15000HZ的超聲波條件下振動(dòng)30-60分鐘，收集提取液；

第一次超濾濃縮：將第一次提取及第二次提取步驟所得提取液混合，使用2000-3000分子量的超濾膜濃縮，得到濃縮液；

第一次醇沉：將第一次超濾濃縮步驟所得的濃縮液，使用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)溶液pH為6-7，加入按溶液體積計(jì)3%的氯化鈉，再加入乙醇，使溶液乙醇濃度達(dá)到60-70%，收集沉淀物；

沉淀物處理：將第一次醇沉步驟所得的沉淀物，與按重量計(jì)1-3%的石墨粉混合均勻；

第三次提取：將處理得到的沉淀物轉(zhuǎn)移至超聲波萃取器中，用去離子水浸沒并加入按溶液體積計(jì)3%的氯化鈉，使用鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH為6-7，升溫至40-50℃，加入按軟骨重量計(jì)0.1-0.4%的單酶，加入按溶液體積計(jì)0.1-0.2%有機(jī)緩沖液，保溫40-50℃，在頻率20000HZ的超聲波條件下振動(dòng)30-60分鐘，收集提取液，其中，所用單酶為鏈霉蛋白酶，所用有機(jī)緩沖液為氯仿、丁醇、己醇、戊醇中的一種；

過濾：將第三次提取步驟所得提取液加入真空抽濾機(jī)中，分別收集分離出的固體及液體；

第二次超濾濃縮：將過濾步驟所得液體，使用2000-3000分子量的超濾膜濃縮，得到濃縮液；

第二次醇沉：將第二次超濾濃縮步驟所得的濃縮液，使用鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液pH為6-7，加入按溶液體積計(jì)3%的氯化鈉，再加入乙醇，使溶液乙醇濃度達(dá)到70-80%，收集沉淀物；

醇洗脫水：將第二次醇沉步驟所得的沉淀物，使用80%濃度的乙醇水溶液洗滌后，使用95%濃度的乙醇水溶液脫水，干燥后得到成品硫酸軟骨素；

其中，第一次提取步驟中所用復(fù)合酶為比例為1-2:1的堿性蛋白酶及胰酶，第二次提取步驟中所用單酶為堿性蛋白酶及胰酶中的一種，第一次提取、第二次提取中所用有機(jī)緩沖液為氯仿、丁醇、己醇、戊醇中的一種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述第一次提取步驟中，按軟骨重量計(jì)，復(fù)合酶的用量為0.8%，復(fù)合酶中堿性蛋白酶及胰酶的比例為1:1，按溶液體積計(jì)，有機(jī)緩沖液的用量為0.1%，超聲波振動(dòng)時(shí)長(zhǎng)為90分鐘。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述第二次提取步驟中，按軟骨重量計(jì)，單酶的用量為0.4%，按溶液體積計(jì)，有機(jī)緩沖液的用量為0.1%，超聲波振動(dòng)時(shí)長(zhǎng)為45分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于：所述第三次提取步驟中，按軟骨重量計(jì)，單酶的用量為0.4%，按溶液體積計(jì)，有機(jī)緩沖液的用量為0.1%，超聲波振動(dòng)時(shí)長(zhǎng)為45分鐘。

5.一種如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述硫酸軟骨素的制備方法所得的硫酸軟骨素在制備動(dòng)脈粥樣硬化疾病藥物中的應(yīng)用。