[發(fā)明專利]一種夏南牛HMGA2基因Indel標(biāo)記的檢測(cè)方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010550697.5
• 申請(qǐng)日: 2020-06-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111560421B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳宏;曹修凱;程杰;王曉剛;黃永震;藍(lán)賢勇;雷初朝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6858
• 分類號(hào): C12Q1/6858;C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種夏南牛HMGA2基因插入缺失突變的檢測(cè)方法在夏南牛分子育種中的應(yīng)用，其特征在于：所述夏南牛HMGA2基因插入缺失突變的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

以待測(cè)夏南牛基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增夏南牛HMGA2基因部分片段，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定夏南牛HMGA2基因插入缺失突變位點(diǎn)的基因型；所述插入缺失突變位點(diǎn)位于牛HMGA2基因chr5:48094736-48094742。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述PCR的擴(kuò)增引物為：

上游引物：5’-CAGGTGGTGTTCAGATCTGCTCTG-3’；

下游引物：5’-CAGGTTGTCTGAGGTCCATCG-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述PCR的擴(kuò)增體系包括50ng/μL模板DNA1.0μL以及10pmol/L的上、下游引物各1μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述PCR的擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸20s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述瓊脂糖凝膠電泳采用質(zhì)量濃度為4％的瓊脂糖凝膠。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述插入缺失突變位點(diǎn)的基因型為：插入/插入型表現(xiàn)為112bp的一個(gè)條帶；插入/缺失型表現(xiàn)為112bp和105bp的兩個(gè)條帶；缺失/缺失型表現(xiàn)為105bp的一個(gè)條帶。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：在早期分子標(biāo)記輔助選擇中，以所述插入缺失突變位點(diǎn)的基因型為缺失/缺失型的個(gè)體形成體型高大的夏南牛種群。