[發明專利]基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法

在審

• 申請號: 202010548414.3
• 申請日: 2020-06-16
• 公開（公告）號: CN111704593A
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 萬海同;金偉鋒;虞立;何昱;楊潔紅;李暢
• 申請（專利權）人: 浙江中醫藥大學
• 主分類號: C07D307/86
• 分類號: C07D307/86;C07J73/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法，屬于中藥提取技術領域。該方法得到最優工藝條件包括：稱取丹參粉末于離心管中，以固液比1:60添加1mg/mL復合酶溶液，復合酶溶液通過將含有纖維素酶和果膠酶質量比1:1.5的復合酶溶于50%乙醇溶液中得到，混合震蕩搖勻，55℃恒溫水浴提取30min，離心取上清液，HPLC法測定測量丹參酮IIA和丹酚酸B提取率。本發明選用合適的酶并進行響應面優化，提高了丹參酮IIA和丹酚酸B的提取量，并通過生物酶響應面法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝。

技術領域

本發明屬于中藥提取技術領域，具體涉及基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法。

背景技術

中藥丹參為唇形科植物丹參(salviamiltiorrhizabge)的干燥植物根和根莖，味苦、歸心、肝經，具有的功效為治療血行不暢和經脈阻滯、治療血熱和止痛、清心除煩和涼血解毒消痹等，多廣泛應用于治療常見的胸痹心痛，脘腹脅痛，熱痹疼痛，心煩不眠，月經不調和慢性痛經以及閉經。丹參中主要成分含有多種脂溶性的二萜醌類化合物和水溶性的多聚酚酸類化合物等成分。其中脂溶性的丹參酮類以具有改善人體的血液循環、抗菌和抗炎的作用，而水溶性的丹酚類則以具有抗物質氧化、抗血液凝固、抗人體血栓形成、治療人體高血脂和對人體的紅細胞保護等的作用。由于丹參中含有的丹參酮IIA及丹酚酸B兩者具有多種的藥用價值，且其需求量日益擴大和增加，丹參藥用有效成分的臨床研究主要重點集中在對抗惡性腫瘤和用于治療多種心腦血管系統疾病這兩方面，并且已經在臨床上取得了令人滿意的實際和臨床應用效果。因此，對其丹參醇提取工藝的設計和優化應用具有重要的實際和應用研究價值。

近年來生物酶解法對于中藥輔助植物提取已有深入研究，酶解法具有高效的催化作用，專一的化學作用性和溫和的化學反應等特點，應用于制藥工業可以顯著地提高生產的效率，減少了成本和環境的污染，還可以能夠有效地提取出一些傳統的方法難以提取得到的生物活性成分。目前,在如何將生物酶法應用于輔助植物提取的中藥成分方面，研究應用較多的方法主要是植物纖維素酶、果膠酶以及各種生物活性蛋白酶等,這些酶的作用可以非常有效和有針對性地破壞植物的細胞壁，有利于多種重要的藥用活性化學成分的釋出，從而來輔助藥用植物的提取，實驗室的研究結果表明生物酶法的應用是一種完全有效和最大化提取方法，是一種較好的輔助中藥材提取藥用生物活性成分的方法。中草藥的藥用生物活性成分非常復雜，比如植物蛋白、果膠、植物纖維和淀粉等這些非活性成分是影響其藥用生物活性成分的提取的其中一個關鍵性因素和障礙。而且傳統的輔助植物提取中藥方法提取的溫度高、收率低，且提取成本高，消耗大量的化學溶劑，增加大量的污染物排放。而選用合適的酶，可通過酶高效的反應，將其非活性成分分解，從而提高藥用成分的提取量。選用合適酶可以將中藥材中非活性成分去除，有利于藥用活性成分的提取。但是酶在丹參酮IIA提取中尚未應用。所以開展此次試驗，旨在考察生物酶法在傳統醇提方法之上，對其提取效率的影響。

響應面法是一種水平試驗設計的方法，主要由box等科學家提出，是一種利用對實驗數據分析方法的設計和對數據進行系統數學建模分析處理而形成相結合的試驗設計方法，獲得了具有顯著和實際具有重要代表性的各個響應因素數據，利用因素與響應值間的函數變化關系進行數學分析，取得各個響應因素最佳的水平響應值。可以在減少試驗次數的同時，獲得相應等高線圖比較直觀的3D立體圖，用來同時考察各個影響因素之間的互相影響作用。

發明內容

針對上述現有技術中存在的問題，本發明的目的在于設計提供基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法。本發明為進一步明確其丹參酮提取的工藝優化參數，在單因素水平試驗基礎上，采用生物酶響應面法進行水平工藝優化，進行五因素三水平工藝優化試驗的設計，快速有效地確定生物酶響應法丹參酮提取的最佳水平響應條件。

基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法，其特征在于包括以下步驟：