[發明專利]基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法

在審

• 申請號: 202010548414.3
• 申請日: 2020-06-16
• 公開（公告）號: CN111704593A
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 萬海同;金偉鋒;虞立;何昱;楊潔紅;李暢
• 申請（專利權）人: 浙江中醫藥大學
• 主分類號: C07D307/86
• 分類號: C07D307/86;C07J73/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

1.基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）稱取丹參粉末于離心管中，以固液比1:20-100添加0.5-2.5mg/mL復合酶溶液，所述復合酶溶液通過將含有纖維素酶和果膠酶的復合酶溶于40-80%乙醇溶液中得到，混合震蕩搖勻，35-75℃恒溫水浴提取20-60min，離心取上清液，HPLC法測定測量丹參酮IIA和丹酚酸B提取率；

（2）以固液比、乙醇濃度、提取時間、提取溫度、復合酶濃度、復合酶酶比為影響因素，以丹參酮IIA和丹酚酸B提取率為指標，進行單因素試驗；

（3）根據步驟（2）得到的影響結果，以固液比、乙醇濃度、提取溫度、復合酶濃度、復合酶酶比為因素，以丹參酮ⅡA、丹酚酸B提取率為響應值，進行五因素三水平的響應面試驗設計；

（4）使用Design-Expert 8.0.6軟件對步驟（3）得到的數據進行分析，獲得丹參酮IIA和丹酚酸B提取率與五個自變量的二元多項回歸方程；

（5）對步驟（4）得到的二元多項回歸方程進行方差分析對比，得到最優的提取工藝條件。

2. 如權利要求1所述的基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法，其特征在于所述步驟（1）中HPLC法測定丹參酮IIA的標準曲線為：Y= 2×10⁶X–3804，R2 = 0.999，HPLC法測定丹酚酸B的標準曲線為：Y= 4×10⁷X + 43789，R2 = 0.999，其中X為濃度mg/mL，Y為峰面積。

3. 如權利要求1所述的基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法，其特征在于所述步驟（1）中HPLC法色譜條件為：色譜柱HypersilBDS C₁₈，300mm×4.6mm，5μm，流動相：乙腈A-0.1%甲酸溶液B，梯度洗脫0-15min，10%-28%B，15-20min，28%-45%B，20-30min，45%-90%B，30-36min，90%-95%B，36-40min，95%-10%B，流速1.0mL/min，檢測波長280nm，柱溫25℃，進樣量10μL。

4. 如權利要求1所述的基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法，其特征在于所述步驟（4）中丹參酮IIA的回歸方程為：Y =7.55+0.15×A+0.062×B+0.012×C+0.29×D+3.48×E-0.15×A×B-0.70×A×C

-0.93×A×D+0.38×A×E+0.050×B×C-0.25×B×D+0.050×B×E+0.30×C×D+0.20×C×E+0.90×D×E+1.71×A²-1.99×B²-1.39×C²-2.48×D²-0.30×E²，其中A為復合酶酶比，B為復合酶濃度，C為固液比，D為提取溫度，E為乙醇濃度。

5.如權利要求1所述的基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法，其特征在于所述步驟（4）中丹酚酸B的回歸方程為：Y=35.10+0.51×A-0.081×B+0.27×C-0.45×D-7.61×E+0.075×A×B-0.075×A×C-0.55×A×D-0.25×A×E-0.57×B×C+0.15×B×D+0.025×B×E-0.38×C×D-0.57×C×E+0.025×D×E-5.16×A²-1.77×B²-0.74×C²-3.44×D²+0.70×E²，其中A為復合酶酶比，B為復合酶濃度，C為固液比，D為提取溫度，E為乙醇濃度。

6.基于響應面的生物酶法優化提取丹參中丹參酮IIA和丹酚酸B的工藝方法，其特征在于包括以下步驟：稱取丹參粉末于離心管中，以固液比1:60添加1mg/mL復合酶溶液，所述復合酶溶液通過將含有纖維素酶和果膠酶質量比1:1.5的復合酶溶于50%乙醇溶液中得到，混合震蕩搖勻，55℃恒溫水浴提取30min，離心取上清液，HPLC法測定測量丹參酮IIA和丹酚酸B提取率。