[發明專利]應用于骨肉瘤細胞成像或治療的Au DENPs-巨噬細胞復合物

有效

• 申請號: 202010547721.X
• 申請日: 2020-06-16
• 公開（公告）號: CN111840324B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 王悍;尹芳芳;史向陽;范鈺
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫院
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786;A61K35/15;A61K31/704;A61K9/51;A61K47/34;A61K47/10;A61P35/00;G01N24/08;G01N23/046;G01N23/04;G01T1/161;G01N15/02;G01N15/14;G01N21
• 代理公司: 上海宛林專利代理事務所(普通合伙) 31361
• 代理人: 張明

本發明公開了一種應用于骨肉瘤的細胞成像以及同時細胞治療的Au?DENPs?巨噬細胞復合物的制備方法：以第五代樹狀大分子為模板，將經馬來酰亞胺活化的聚乙二醇單甲醚通過化學鍵間相互作用連接在G5.NHsubgt;2/subgt;的一端。上述得到的化合物通過物理吸附作用將HAuClsubgt;4/subgt;整合在一起，再用NaBHsubgt;4/subgt;經過原位還原，最后，通過乙酸酐將樹狀大分子表面的氨基全部乙酰化以得到最終產生[(Ausupgt;0/supgt;)subgt;100/subgt;?G5.NHAc?mPEG]DENPs，簡稱為Au?DENPs。將Au?DENPs與小鼠單核巨噬細胞RAW264.7細胞共培養獲得Au?DENPs?巨噬細胞復合物，可以用于小鼠骨肉瘤的細胞治療或微環境中的CT成像，在腫瘤診療領域具有潛在的應用價值。

技術領域

本發明涉及納米醫學診療試劑領域，尤其涉及一種應用于骨肉瘤的細胞成像或細胞治療的Au?DENPs-巨噬細胞復合物及其制備方法。

背景技術

納米醫學正在逐漸改變癌癥治療方法，并為腫瘤的診治帶來新的希望。比如，某些被動靶向或者主動靶向腫瘤的納米藥物遞送系統可以實現藥物在機體的準確遞送，從而避免對正常組織的毒害作用，延長藥物在體內的代謝過程，進而增強藥物的療效。

實現腫瘤對于免疫納米藥物的反應成像是設計、開發和應用有效的靶向治療的關鍵。為了驗證靶標的準確性，必須監測納米藥物在臨床相關組織中的分布，最好是使用非侵入性的手段，以確定目標組織的吸收和非目標組織的最低吸收。實現這一目標最直接的方法是對納米材料進行標記，這樣就可以使用成像系統，如MRI(磁共振成像)、CT(計算機斷層掃描)在體檢測到納米材料。這樣不僅可以確定納米粒子的生物分布，還可以監測腫瘤對治療的反應性以及其他相關反應，例如腫瘤的免疫細胞浸潤情況。納米顆粒與周圍環境和可能相互作用的細胞類型范圍之間可能發生相互作用。例如，納米顆粒的物理特性可以在免疫抑制，超敏反應，免疫原性和自身免疫方面影響免疫系統。這些相互作用可以導致多種影響，例如改變信號通路，破壞感染細胞的病毒以及細胞內分泌的分子，蛋白質和染色質復合物。此外，納米粒子可以通過直接或誘導細胞壞死之類的間接作用而刺激先天和適應性免疫應答。

以往癌癥納米醫學的研究重點是靶向腫瘤或基質細胞，而將納米顆粒作為具有抗腫瘤應答作用的有效免疫刺激劑——癌癥免疫療法成為癌癥治療的新方向。與傳統療法相反，癌癥免疫療法通過增強宿主自身的免疫系統來特異性地檢測，識別和破壞惡性細胞。納米粒子具有多種理化特性，可以作為潛在的免疫激活劑。通過合理設計的癌癥免疫納米結構刺激先天和適應性免疫系統對于增強抗腫瘤作用將是重要的。

腫瘤的發生以及進展過程中會重塑宿主的免疫環境，其中某些免疫細胞比如巨噬細胞，在正常機體中起到清除病菌，起到防御功能。腫瘤相關巨噬細胞(tumor?associatedmacrophage，TAM)是腫瘤微環境中的一個關鍵組成部分，它們大約占據腫瘤重量的50％。在腫瘤發生發展過程中，循環中的巨噬細胞可以被募集到腫瘤微環境中，在腫瘤逃避機體的免疫監視中起到了突出的作用。研究表明，TAM大致可以分為兩類：M1型和M2型巨噬細胞，而且受到不同刺激，兩種類型之間可以實現轉化。其中M1型巨噬細胞可以高度表達CD86、iNOS以及TNF-α等，可以起到抑制腫瘤的作用。而腫瘤組織中的TAM大多表現為M2型，可以促進腫瘤的生長、血管生成、侵襲轉移。眾多研究表明，腫瘤相關巨噬細胞在肺癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、膠質母細胞瘤以及骨肉瘤等多種腫瘤進展中起到重要作用。這些證據表明針對TAM是腫瘤治療的一種可行的策略。這些策略可以分為三類：1)抑制腫瘤招募TAM；2)直接殺傷TAM；3)再教育TAM，使其由M2-促腫瘤表型轉變為M1抗腫瘤表型。因此，開發新的納米藥物針對TAM，逆轉免疫抑制的腫瘤微環境是一種很有前景的機會。

具有靶向和殺死或再教育腫瘤相關巨噬細胞能力的新型納米藥物的工程設計是癌癥免疫治療的策略，可以誘使富含巨噬細胞有利于腫瘤細胞的腫瘤微環境有效地轉變為抗腫瘤的類型。此外，以TAM為靶標的成像納米結構的發展可用于研究實體瘤中巨噬細胞的含量，反應治療的療效以及預后信息，從而更好地診斷和預測癌癥。