[發明專利]一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備方法

在審

• 申請號: 202010545952.7
• 申請日: 2020-06-16
• 公開（公告）號: CN111704566A
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 徐紅巖;張家寶;付靜晗;李仲才;朱銀;曹世團;付等良
• 申請（專利權）人: 吉爾生化（上海）有限公司
• 主分類號: C07C323/25
• 分類號: C07C323/25;C07C319/20
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司 31113
• 代理人: 張勁風

1.一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）、將谷氨酸加入水和丙酮的混合液中，再加入氫氧化鈉攪拌，冰浴降溫并加入氨基保護劑fmoc基團供體進行反應，TLC跟蹤檢測進程，后經過酸化萃取、水洗，鹽水洗，制得到fmoc-glu-OH；

(2)、將fmoc-glu-OH和芐基供體混合于二甲基甲酰胺中，加入木瓜蛋白酶并加熱反應,TLC跟蹤監測反應進程，反應好后加水稀釋，并經乙酸乙酯洗滌，在加醋酸乙酯和檸檬酸酸化萃取，并經水洗，鹽水洗，濃縮加石油醚結晶制得fmoc-glu-obzl；

（3）、將2-巰基乙胺加入冰醋酸中，升溫，之后加入三苯甲基供體物，之后緩慢加入三甲基氯硅烷，機械攪拌反應，之后降溫至4-6℃，并用醋酸鈉水溶液調節體系pH值并攪拌結晶，之后將體系過濾，濾餅經水和乙醚沖洗，晾干后制備得到S-三苯甲基半胱胺；

（4）、將fmoc-glu-obzl加入THF中，機械攪拌并降溫，之后加入縮合劑和三乙胺，之后再加入S-三苯甲基半胱胺反應，TLC跟蹤監測反應進程，反應完后減壓濃縮出去thf，之后加乙酸乙酯溶解，再經酸水洗、堿水洗，水洗，鹽水洗，干燥，濃縮結晶得fmoc-glu(NHCH₂CH₂Strt)-obzl；

（5）、將fmoc-glu(NHCH₂CH₂Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入鈀炭，并通氫氣反應，TLC跟蹤監測進程，反應完成后，過濾去鈀炭，之后濃縮至干加少許醋酸乙酯溶解并加石油醚結晶，之后抽濾烘干得fmoc-glu(NHCH₂CH₂Strt)-COOH。

2.根據權利要求1所述的一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備

方法，其特征在于，所述步驟（1），谷氨酸和fmoc-基團的物質的量比為1:（1-1.5），反應的溫度為：10-20℃，反應時間為6-12h，所述的fmoc-基團供體為fmoc-osu、fmoc-CL或fmoc-NH₂中的一種。

3.根據權利要求2所述的一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備方法，其特征在于，所述的fmoc-基團供體為fmoc-osu。

4.根據權利要求1所述的一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備方法，其特征在于，所述步驟（2），fmoc-glu-OH、芐基供體的物質的量比為：1:（1-1.6），反應溫度為38-42℃，反應時間為22-26h，所述木瓜蛋白酶的用量為氨基酸質量的10%-15%，所述芐基供體為苯甲醇、溴化芐或氯化芐中的一種。

5.根據權利要求1所述的一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備方法，其特征在于，所述步驟（3），2-巰基乙胺、三苯甲基供體物和三甲基氯硅烷的物質的量比為1：（1-1.5）：（0.9-1.3），所述反應溫度為30-50℃，所述反應時間為2-6h，所述三苯甲基供體物為三苯甲醇、三苯基溴甲烷、三苯基氯甲烷中的一種。

6.根據權利要求1所述的一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備方法，其特征在于，所述步驟（4），fmoc-glu-obzl、縮合劑和S-三苯甲基半胱胺的比為：1:（0.9-1.3）:（1-1.3），所述反應溫度為5-15℃，所述反應時間14-18h，所述的縮合劑為HTBU、TBTU或HOBT中的一種。

7.根據權利要求1所述的一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備方法，其特征在于，所述步驟（5），所加的鈀炭用量為氨基酸量的5%-15%，所述反應時間為12-24h。

8.根據權利要求1所述一種N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制備方法，其特征在于, 所述TLC跟蹤檢測進程的條件：1）正丁醇：冰醋酸：水的體積比=4:1:1，2）三氯甲烷:甲醇:乙酸體積比=90:8:2。