[發明專利]一種具有高熱穩定性的黃遞酶突變體、基因及其制備方法有效
| 申請號： | 202010544855.6 | 申請日： | 2020-06-15 |
| 公開（公告）號： | CN111662888B | 公開（公告）日： | 2021-11-26 |
| 發明（設計）人： | 岳碩豪;鄭長龍 | 申請（專利權）人： | 北京達成生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12Q1/32;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504 | 代理人： | 李婷玉 |
| 地址： | 101200 北京市昌平區中關村科技*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 具有 高熱 穩定性 黃遞酶 突變體 基因 及其 制備 方法 | ||
1.一種具有高熱穩定性的黃遞酶突變體，其特征在于，所述黃遞酶突變體是將野生型黃遞酶氨基酸序列的第122位氨基酸由甘氨酸突變為天冬氨酸獲得的，所述黃遞酶突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一種具有高熱穩定性的黃遞酶突變體基因，其特征在于，所述黃遞酶突變體基因編碼如權利要求1所述的具有高熱穩定性的黃遞酶突變體。
3.根據權利要求2所述的具有高熱穩定性的黃遞酶突變體基因，其特征在于，所述黃遞酶突變體基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
4.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體含有如權利要求2或3所述的黃遞酶突變體基因。
5.一種重組微生物，其特征在于，所述重組微生物含有如權利要求2或3所述的黃遞酶突變體基因。
6.一種試劑盒，其特征在于，包含如權利要求1所述的具有高熱穩定性的黃遞酶突變體。
7.一種制備高熱穩定性黃遞酶突變體的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1.構建高熱穩定性黃遞酶突變體基因工程菌株，所述高熱穩定性黃遞酶突變體基因工程菌株含有如權利要求2或3所述的黃遞酶突變體基因；
S2.將所述高熱穩定性黃遞酶突變體基因工程菌株接種于種子培養基中，進行種子培養；
S3.將種子培養后的所述高熱穩定性黃遞酶突變體基因工程菌株接種于發酵培養基中，進行發酵培養，得到所述高熱穩定性黃遞酶突變體。
8.根據權利要求7所述的制備高熱穩定性黃遞酶突變體的方法，其特征在于，步驟S1包括以下步驟：
S101.合成所述黃遞酶突變體基因；
S102.將所述黃遞酶突變體基因克隆至表達載體，得到重組載體，所述表達載體為pET28a；
S103.將所述重組載體轉入感受態細胞，篩選陽性轉化子，得到所述高熱穩定性黃遞酶突變體基因工程菌株，所述感受態細胞為大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞。
9.根據權利要求7所述的制備高熱穩定性黃遞酶突變體的方法，其特征在于，步驟S2具體為：
取所述高熱穩定性黃遞酶突變體基因工程菌株接種到LB培養基，于25-40℃、100-200rpm的條件下培養10-20h。
10.根據權利要求7所述的制備高熱穩定性黃遞酶突變體的方法，其特征在于，步驟S3包括以下步驟：
S301.將步驟S2中種子培養得到的菌液以1％-10％的接種量轉入TB液體培養基中，于25-40℃、100-200rpm的條件下，培養至OD600為0.7-0.8；
S302.將步驟S301所得菌液于10-20℃、100-200rpm的條件下培養18-20h得到發酵液；
S303.離心處理所述發酵液，除去上清液，加入磷酸鉀緩沖懸浮細胞，并對細胞進行破碎處理；
S304.對破碎后的細胞進行離心分離，取離心分離上清液用親和層析的方法進行純化，得到所述高熱穩定性黃遞酶突變體。
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