[發明專利]一種即用型葉酸檢測載體及其制備方法

有效

• 申請號: 202010543809.4
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111705102B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發明（設計）人: 齊延林;王舒樂;張恒;胡云平
• 申請（專利權）人: 深圳市瑞賽生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N1/04;C12R1/225;C12R1/01
• 代理公司: 深圳中圳知識產權代理事務所(普通合伙) 44768
• 代理人: 廖苑濱

本發明公開了一種即用型葉酸檢測載體及其制備方法，該制備方法包括以下步驟：（1）將葉酸測試培養基與塑形填充劑混合，裝入載體容器后凍干，獲得葉酸測試培養基固定層；（2）將抗氧化阻隔液與塑形填充劑混合，裝入載體容器后凍干，獲得位于葉酸測試培養基固定層上的抗氧化阻隔層；（3）將已活化的葉酸測試菌種分散于凝膠保護劑中，取菌懸液黏附于載體容器中并固定化干燥。本發明將精準定量的葉酸測試菌種及葉酸測試培養基溶液重塑于容器中，確保菌種及培養基的穩定性，無需菌種復壯及培養基稱量、溶解、滅菌、分裝等繁瑣的制備過程，檢測時只需加入葉酸標準溶液或樣品提取液即可完成實驗，減少實驗操作步驟，提高檢測效率。

技術領域

本發明屬于水溶性維生素檢測載體制備技術領域，具體涉及一種即用型葉酸檢測載體及其制備方法。

背景技術

國標中規定，微生物法是作為測定食品中葉酸、維生素B12、泛酸、生物素、維生素B6、煙酸等維生素的首選方法。微生物法實驗前準備主要包括三大步驟：測試菌種的制備、試樣/標準品的制備和培養基的配制。其中，測試菌種的制備需傳代2~3代增強活力，耗費時間長，染菌幾率大。而正確制備培養基是微生物實驗室檢測工作的基礎，事關檢測工作的準確性、可靠性。國標微生物法測定水溶性維生素的培養體系為10mL，試劑用量大，檢測成本較高。

因微生物的營養需求范圍大，葉酸測試培養基中營養物質組分達25種以上，部分試劑組分含量極少，稱量及配制的工作繁重。而商品化干粉合成培養基在一定程度上解決培養基繁瑣的配制過程，但干粉培養基貯存條件較高，開封后干粉易吸潮結塊變質，且國內現有的干粉培養基生產技術亦難以保證干粉物料的均質性及不同批次間的重復性。無論實驗室自配培養基，亦或購買商品化的干粉合成培養基，均需經過稱量、溶解、滅菌、分裝的制備過程，培養基的制備過程中也常出現待測物質帶入的污染風險，導致無法達到實驗方法的檢測效果。

中國發明專利CN201710001927公開一種用于微生物法定量檢測葉酸的微孔板、其試劑盒及其制備方法，美國發明專利US8357504B2公開一種微生物定量檢測混合物中維生素的方法及試劑盒，上述發明專利方案中均提供了菌種、培養基、無菌水和標準品的制備方法，但仍存在以下問題：（1）測試菌種的制備使用脫脂奶粉培養菌種至凝乳狀，菌種不易分離獲得；（2）低真空室溫的沸騰方式干燥菌種，易造成部分菌液噴出容器，導致容器中干燥菌量不一致；（3）微孔板上僅包含干燥菌種，使用時培養基需另外制備，培養基制備分裝過程存在染菌風險。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供了一種即用型葉酸檢測載體及其制備方法，本發明將精準定量的葉酸測試菌種及葉酸測試培養基溶液重塑于容器中，確保菌種及培養基的穩定性，無需菌種復壯及培養基稱量、溶解、滅菌、分裝等繁瑣的制備過程，該載體容器中包含葉酸測試培養基層、抗氧化阻隔層及干燥的葉酸測試菌種，檢測時只需加入葉酸標準溶液或樣品提取液即可完成實驗，減少實驗操作步驟，提高檢測效率。

本發明的上述目的是通過以下技術方案予以實現的：

一種即用型葉酸檢測載體的制備方法，其包括以下步驟：

（1）將葉酸測試培養基與塑形填充劑充分混合，裝入載體容器后凍干，獲得葉酸測試培養基固定層；

（2）將抗氧化阻隔液與塑形填充劑充分混合，裝入載體容器以覆蓋在已凍干的葉酸測試培養基固定層上，凍干獲得位于葉酸測試培養基固定層上的抗氧化阻隔層；

（3）將已活化的葉酸測試菌種分散于凝膠保護劑中，取菌懸液黏附于載體容器中并固定化干燥，即得即用型葉酸檢測載體。

優選但不限定地，一種即用型葉酸檢測載體的制備方法，其包括以下步驟：

（1）將葉酸測試培養基與塑形填充劑充分混合，取30~200μL分裝入微孔中，確保溶液體積浸滿微孔底部，并置于-80℃~-65℃無菌冷凍設備中迅速冷凍固定1~2.5h，獲得葉酸測試培養基固定層；