[發(fā)明專利]使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測(cè)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010543463.8
• 申請(qǐng)日: 2020-06-15
• 公開（公告）號(hào): CN111650315B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李炯函;相明輝;張新宇;欒洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/74;G01N21/64
• 代理公司: 上海上大專利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

本發(fā)明公開了一種使用熒光衍生化?高效液相色譜檢測(cè)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，是一種能用于1,3?丁二烯(簡(jiǎn)稱丁二烯)的醇類代謝產(chǎn)物(包括1?氯?3?丁烯?2?醇、反式和順式?4?氯?2?丁烯?1?醇，以及3?丁烯?1,2?二醇)的熒光衍生化?高效液相色譜檢測(cè)方法，它屬于化學(xué)檢測(cè)方法領(lǐng)域，包括液液萃取樣品中丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物，再通過(guò)9?芴乙酸、均三甲基磺酰氯和4?二甲氨基吡啶衍生化，最后使用高效液相色譜?熒光檢測(cè)，外標(biāo)法定量。經(jīng)驗(yàn)證，本發(fā)明所述的熒光衍生化?高效液相色譜方法具有專一性強(qiáng)和準(zhǔn)確性高等特點(diǎn)，為研究丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物提供了一個(gè)可靠的工具，具有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，應(yīng)用于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

丁二烯是一種無(wú)色具有微弱芳香氣味的氣體，是一種重要的石油化工原料。化石燃料燃燒和生物質(zhì)燃燒等都會(huì)產(chǎn)生丁二烯。丁二烯在環(huán)境中來(lái)源廣泛，如汽車尾氣，森林火災(zāi)和香煙煙霧等。這也導(dǎo)致丁二烯在環(huán)境中普遍存在，其濃度為0.04-0.9ppb。丁二烯是一種致癌物且具有很高的致癌風(fēng)險(xiǎn)，職業(yè)暴露丁二烯與淋巴造血系統(tǒng)癌癥相關(guān)。

目前，丁二烯的致癌機(jī)理尚不清楚，但已確定丁二烯本身并不致癌，其致癌性來(lái)源于代謝產(chǎn)物。丁二烯經(jīng)過(guò)細(xì)胞色素P450酶代謝為3,4-環(huán)氧-1-丁烯等一系列代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物已經(jīng)被證明在活體內(nèi)存在，且具有致突變性和致癌性。

丁二烯也可以通過(guò)髓過(guò)氧化酶在H₂O₂和高濃度Cl^-條件下轉(zhuǎn)化為CHB、E-CBol和Z-CBol，這些化合物具有遺傳毒性，但目前丁二烯經(jīng)過(guò)髓過(guò)氧化酶轉(zhuǎn)化僅通過(guò)純化的酶以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，在生物體內(nèi)仍缺乏證據(jù)。證明該轉(zhuǎn)化過(guò)程在體內(nèi)存在，需要一種靈敏和特異性的檢測(cè)CHB、E-CBol和Z-CBol的方法。

由于這些化合物沸點(diǎn)不高且在生物樣品中含量很少，即使使用低沸點(diǎn)溶劑如乙醚萃取，在溶劑除去過(guò)程中大部分化合物也被同時(shí)除去，因此無(wú)法通過(guò)簡(jiǎn)單的萃取-濃縮-GC/MS方法進(jìn)行檢測(cè)，需要開發(fā)針對(duì)性的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于克服已有技術(shù)存在的不足，提供一種使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測(cè)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，解決了沒有合適方法檢測(cè)這些化合物的問題。此方法通過(guò)摸索最優(yōu)的衍生化反應(yīng)條件和液相色譜條件，配合樣本提取、溶液配制、衍生化產(chǎn)物熒光檢測(cè)條件以及外標(biāo)法定量，提供了一種檢測(cè)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法。本方法使用9-芴乙酸(9-fluorenylacetic acid，F(xiàn)AA)和三乙胺(triethylamine，TEA)的混合CH₂Cl₂溶液、均三甲基磺酰氯(2-mesitylenesulfonylchloride，METS)和4-二甲氨基吡啶((4-dimethylamino)pyridine，DMAP)的CH₂Cl₂溶液與丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物一鍋反應(yīng)，將其衍生化為對(duì)應(yīng)的酯。本發(fā)明方法具有專一性強(qiáng)和準(zhǔn)確性高等特點(diǎn)，為研究丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物提供了一個(gè)可靠的工具，具有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

為達(dá)到上述發(fā)明創(chuàng)造目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測(cè)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，包含以下步驟：

(1)試劑配制：

分別配制9-芴乙酸和三乙胺的混合CH₂Cl₂溶液、均三甲基磺酰氯和4-二甲氨基吡啶的CH₂Cl₂溶液，備用；

并配制待測(cè)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)化合物母液，將不同的標(biāo)準(zhǔn)化合物母液分裝存儲(chǔ)，備用；

(2)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物提取：