[發(fā)明專利]使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010543463.8
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111650315B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李炯函;相明輝;張新宇;欒洋
• 申請（專利權(quán)）人: 上海大學(xué)
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74;G01N21/64
• 代理公司: 上海上大專利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

1.一種使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)試劑配制：

分別配制9-芴乙酸和三乙胺的混合CH₂Cl₂溶液、均三甲基磺酰氯和4-二甲氨基吡啶的CH₂Cl₂溶液，備用；

并配制待測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)化合物母液，將不同的標(biāo)準(zhǔn)化合物母液分裝存儲，備用；

(2)丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物提取：

從待測樣品中，以CH₂Cl₂液液萃取丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物，得到待測樣品的CH₂Cl₂溶液；

(3)衍生化反應(yīng)過程：

將在所述步驟(1)中配制的9-芴乙酸和三乙胺的混合CH₂Cl₂溶液、均三甲基磺酰氯和4-二甲氨基吡啶的CH₂Cl₂溶液和在所述步驟(3)中的萃取出的待測樣品的CH₂Cl₂溶液混合，進(jìn)行一鍋反應(yīng)，將其衍生化為對應(yīng)的酯類產(chǎn)物；

(4)使用高效液相色譜-熒光檢測，外標(biāo)法進(jìn)行定量，從而得出待測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，待測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物包括1-氯-3-丁烯-2-醇、反式-4-氯-2-丁烯-1-醇、順式-4-氯-2-丁烯-1-醇和3-丁烯-1,2-二醇中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，在所述步驟(1)中，進(jìn)行試劑配制時，9-芴乙酸和三乙胺的CH₂Cl₂溶液濃度分別為10和13.8mg/mL，均三甲基磺酰氯的CH₂Cl₂溶液濃度為3mg/mL，4-二甲氨基吡啶的CH₂Cl₂溶液濃度為2.5mg/mL，現(xiàn)配現(xiàn)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，進(jìn)行衍生化反應(yīng)過程時，將50μL的濃度為10mg/mL的FAA和TEA的CH₂Cl₂溶液，依次加入150μL含有待測樣品的CH₂Cl₂溶液，500μL的3mg/mLMETS的CH₂Cl₂溶液以及500μL 2.5mg/mL的DMAP的CH₂Cl₂溶液，進(jìn)行混合；各衍生化試劑FAA、TEA、METS、DMAP的摩爾比為1:1.5:2.2:4.5，該比例可調(diào)，并保證TEA、METS和DMAP均過量于FAA，DMAP過量于METS；各衍生化試劑濃度可變，F(xiàn)AA濃度在0.001-100mg/mL范圍內(nèi)選擇，其它衍生化試劑濃度按照上述各衍生化試劑FAA、TEA、METS、DMAP的摩爾比進(jìn)行相應(yīng)調(diào)節(jié)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，進(jìn)行衍生化反應(yīng)過程時，反應(yīng)至少1.5h，然后除去溶劑，采用200μL甲醇重溶，經(jīng)0.22μm濾膜過濾待分析。

6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述使用熒光衍生化-高效液相色譜檢測丁二烯的醇類代謝產(chǎn)物的方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，衍生化反應(yīng)后的溶劑去除使用旋蒸、氮吹和離心濃縮中至少一種方式。