[發明專利]尿液中梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒、制備方法及使用方法

在審

• 申請號: 202010540443.5
• 申請日: 2020-06-15
• 公開（公告）號: CN111638331A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 詹利紅;申慶紅;楊衛平;李美霞;張培蕾
• 申請（專利權）人: 鄭州方欣生物科技有限責任公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了尿液中梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒、制備方法及使用方法，包括檢測試紙條，檢測試紙條包括樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水紙和PVC底板，所述樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙依次粘附在PVC底板上，所述結合墊上包被有重組蛋白A（SPA）?膠體金標記物，所述硝酸纖維素膜上分別包被有TP重組抗原構成的檢測線和兔抗SPA構成的質控線。另外，本發明通過濃縮介質將尿液標本濃縮，以提高尿液中梅毒螺旋體抗體的含量，從而提高了梅毒螺旋體抗體膠體金檢測試劑盒的靈敏度。可使檢測靈敏度提高2?6倍。本發明以尿液為檢測樣本，取樣安全、簡便、無創。且靈敏度高，特異性強，操作便捷，適于各種條件的檢測。

技術領域

本發明涉及尿液中梅毒螺旋體抗體檢測技術領域，具體為尿液中梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒、制備方法及使用方法。

背景技術

梅毒是由梅毒螺旋體感染所致的慢性性傳播疾病，主要通過性接觸直接傳播，接吻、手術、哺乳、輸血和接觸污染物也可被傳染，可侵犯多系統多臟器，其臨床癥狀復雜，易被漏診和誤診。梅毒實驗室診斷方法主要有分子生物學診斷、病原學診斷和血清學診斷三大類，因前兩類方法實驗條件要求高，僅限于科研單位和教學機構使用，血清學診斷是臨床廣泛使用的方法。目前，臨床實驗室血清學診斷最常用的梅毒抗體檢測方法為梅毒螺旋體抗體酶聯免疫吸附試驗（ＴＰ－ＥＬＩＳＡ）、梅毒甲苯胺紅血清不加熱血清試驗（ＴＲＵＳＴ）、梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗（ＴＰＰＡ）。

梅毒作為一種嚴重危害人類健康的性傳播疾病，選擇敏感性高、特異性強的檢測方法對于梅毒的確證和臨床指導應用均具有很重要的意義。血清學梅毒螺旋體抗體檢測法是目前梅毒實驗室診斷的主要方法，但血清取樣麻煩、有創、且有感染風險。尿液取樣方便、安全、無創，但尿液中梅毒螺旋體抗體含量很低，試劑靈敏度很難達到檢測水平。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有的缺陷，提供尿液中梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒、制備方法及使用方法，檢測樣本為尿液，和血清相比，取樣無創、方便、安全、易得，操作便捷，安全無創，不需要特殊設備及專業培訓，適于各種條件下的應用，通過濃縮介質對尿液進行濃縮，對試劑靈敏度有很大提高可以有效解決背景技術中的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：尿液中梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒，包括檢測試紙條，所述檢測試紙條由在PVC板上固定的樣品墊、結合墊、包被檢測線和質控線的硝酸纖維素膜、吸水紙組成，結合墊上包被有金標SPA，硝酸纖維素膜檢測線上包被有梅毒螺旋體重組抗原，質控線上包被有兔抗SPA。

尿液中梅毒螺旋體抗體檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟；

1）膠體金的制備：用氯金酸溶液和檸檬酸三鈉溶液制備小顆粒膠體金溶液；

2）重組蛋白A標記：將重組蛋白A加入小顆粒膠體金溶液中，制備重組蛋白A-膠體金標記物；

3）結合墊的制備：將重組蛋白A-膠體金標記物浸泡玻璃纖維，制得結合墊；

4）TP重組抗原包被：在硝酸纖維素膜上分別包被TP重組抗原構成的檢測線和兔抗SPA構成的質控線；

5）試紙的制備：將樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙依次固定在PVC底板上，即得。

進一步的，在結合墊的制備時，以氯金酸-檸檬酸鈉還原法制備25nm膠體金溶液，制備完成后取100ml，用0.2M K₂CO₃調PH至8.0，按15ug/ml標記濃度加入SPA，室溫攪拌30min，按0.5%終濃度加入10%BSA，室溫攪拌30min，11000rpm轉速于離心機中離心50分鐘后，棄上清，加入膠體金復溶液定容至100ml，按照30cm²/ml比例將溶液均勻地鋪在玻璃纖維上，干燥制成膠體金墊。