[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010540409.8
• 申請(qǐng)日: 2020-06-15
• 公開（公告）號(hào): CN111679076A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鐘越;齊玲;王曉軍;沈楠;陳飛兒;王瑋瑤;陳雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林醫(yī)藥學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11369
• 代理人: 許小東

1.一種用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括：固相載體和包被于固相載體上的cyclinD1和BCL-2抗體、樣本稀釋液、酶標(biāo)抗體、酶標(biāo)抗體稀釋液、顯色液、終止液、洗滌液、強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照表。

2.如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述固相載體為96孔酶標(biāo)板。

3.如權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)抗體為HRP羊抗人IgG。

4.如權(quán)利要求3所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述樣本稀釋液含有1％BSA的PBST緩沖液。

5.如權(quán)利要求4所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述顯色液為0.02％四甲基聯(lián)苯胺。

6.如權(quán)利要求5所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述終止液為2M的濃硫酸。

7.如權(quán)利要求6所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述洗滌液為含0.05％吐溫-20的pH7.4的0.01M的PBST緩沖液。

8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照表制備過程為：

步驟1、用碳酸鹽緩沖液稀釋cyclinD1和BCL-2抗體至濃度為5μg/ml，加入酶標(biāo)板，每板100μl，4℃包被過夜；

步驟2、將cyclinD1和BCL-2的待測(cè)樣本進(jìn)行稀釋，將稀釋好的樣本、cyclinD1標(biāo)準(zhǔn)品和BCL-2標(biāo)準(zhǔn)品100μl分別加入上述酶標(biāo)板，室溫放置1h；洗板后加入稀釋的HRP羊抗人IgG，室溫放置30min，洗板后加入顯色液，顯色后終止反應(yīng)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)A450值，通過cyclinD1標(biāo)準(zhǔn)品和BCL-2標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣本cyclinD1和BCL-2的濃度；

步驟3、將包被待測(cè)樣本均以包被緩沖液作不同比例的稀釋，每一稀釋度加一橫列，每孔100μl，4℃包被過夜，將包被cyclin D1抗體和包被BCL-2抗體均以相同的比例稀釋，每一稀釋度加一豎排，每孔100μl，進(jìn)行ELISA方陣法測(cè)定，確定包被待測(cè)樣本的最佳工作濃度，單克隆cyclin D1抗體和單克隆BCL-2抗體最佳濃度；

步驟4、選擇1份抗cyclinD1和BCL-2抗體強(qiáng)陽(yáng)性離體血清，稀釋包被cyclinD1和BCL-2抗體的到抗體最佳濃度，分別將強(qiáng)陽(yáng)性血清稀釋后作半對(duì)數(shù)曲線，取半對(duì)數(shù)曲線的線性段內(nèi)的稀釋度血清為試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品，確定6份標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度后根據(jù)抗原濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

9.如權(quán)利要求8所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，在所述步驟1中，稀釋cyclinD1和BCL-2抗體至濃度為5μg/ml；

在所述步驟2中，選取cyclinD1標(biāo)準(zhǔn)品和BCL-2標(biāo)準(zhǔn)品濃度均為0.15μg/ml～10μg/ml；以及

在所述步驟4中，確定6份標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度分別為1.6μg/ml、2.4μg/ml、3.2μg/ml、4μg/ml、4.8μg/ml、5.6μg/ml。

10.如權(quán)利要求9所述的用于檢測(cè)cyclinD1和BCL-2抗體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，在所述步驟2中，

cyclinD1標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y＝-0.0187x²+0.4497x+0.1812；

BCL-2標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y＝-0.0175x²+0.4118x+0.1702。