[發明專利]一種用于檢測未知樣品年齡的引物組、試劑盒其使用方法

在審

• 申請號: 202010538742.5
• 申請日: 2020-06-13
• 公開（公告）號: CN111593130A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 邵武;董進法;林春美;梁耀極;謝璐;賴宏祉
• 申請（專利權）人: 遼寧省公安廳;遼寧佰昊生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 戴秀秀

本發明公開了一種用于檢測未知樣品年齡的引物組，包括以4個位點作為甲基化標志物對應的8組引物序列，所述甲基化標志物分別為：ITGA2B、KLF14、RASSF5、PDE4C，所述8組引物序列分別為ITGA2B?F、ITGA2B?R、KLF14?F、KLF14?R、RASSF5?F、RASSF5?R、PDE4C?F、PDE4C?R。一種用于檢測未知樣品年齡的試劑盒，包括含有權利要求1所述的引物組以及PCR反應體系。一種用于檢測未知樣品年齡的試劑盒的使用方法，用所述的引物組對待測樣品進行擴增，檢測擴增產物中甲基化情況，進而確定樣品年齡。本發明針對甲基化位點(ITGA2B，KLF14，RASSF5，PDE4C)序列，設計特異性擴增引物組，并基于該引物組建立了未知樣品年齡檢測方法，可對2組2重甲基化位點進行定性檢測。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體是指一種用于檢測未知樣品年齡的引物組、試劑盒其使用方法。

背景技術

個體年齡推斷一直是法醫學研究的重要內容。目前實際工作中主要依據法醫人類學的方法，通過測量骨骼形態學指標，應用相應模型推斷個體年齡。實踐證明，法醫人類學個體年齡推斷技術已經比較成熟，誤差也相對較小，且骨骼保留時間長，甚至經過百萬年的時間仍可能通過形態特征揭示年齡信息。目前，通過X射線、大體骨骼形態、牙齒形態等骨骼形態信息可初步推斷個體年齡。多種骨骼用于推斷個體年齡，包括恥骨、胸骨、股骨、鎖骨等。但是在遇到檢測所需的骨骼檢材缺失的案例時，法醫人類學技術的應用就會受到極大的限制，此時通過其他生物組織來推斷個體年齡就顯得尤為重要。近年來，年齡推斷已發展到分子生物學領域。新興的表觀遺傳學研究發現DNA甲基化與衰老之間存在著密切的相關性。

DNA甲基化與衰老之間的關系很復雜。早期研究認為衰老會導致基因組整體低甲基化，然而后續研究發現，包括多種腫瘤抑制基因及多梳靶基因在內的位點隨著年齡的增加，呈現高甲基化。目前以歐美人群為對象的DNA甲基化與衰老之間關系的研究較多，并通過篩選年齡相關DNA甲基化位點，成功將DNA甲基化應用于年齡推斷的研究與實踐中，證實了這一研究的可行性與現實意義。地域環境對DNA甲基化的影響是不可忽視的，然而迄今為止，針對中國漢族人群的研究還很有限，這一問題還需要深入研究。目前年齡相關DNA甲基化位點研究見表1-3，本項目可以基于這些研究進行進一步篩查。

除地域環境外，性別、酗酒、吸煙、疾病等因素也會影響DNA甲基化情況，這可能是目前采用DNA甲基化方法進行年齡推斷時準確率低，特別是60歲以上人群準確率下降(慢性病多發、不良嗜好引起的問題堆加)的主要原因。那么，如何提高通過篩選年齡相關DNA甲基化位點，推斷年齡的特異性成為了亟待解決的問題，而考察年齡相關DNA甲基化位點在不同性別、不同狀態下人群中的變化情況，可能為闡明這一問題，提高推斷年齡準確率提供重要的理論支撐。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服以上技術缺陷，提供一種用于檢測未知樣品年齡的引物組、試劑盒其使用方法，其緩解現有技術中檢測所需的骨骼檢材缺失，導致傳統檢測方法無法檢測的技術問題。

為了達到上述發明目的，本發明采用的技術方案為：一種用于檢測未知樣品年齡的引物組，包括以4個位點作為甲基化標志物對應的8組引物序列，所述甲基化標志物分別為：ITGA2B、KLF14、RASSF5、PDE4C，所述8組引物序列分別為ITGA2B-F、ITGA2B-R、KLF14-F、KLF14-R、RASSF5-F、RASSF5-R、PDE4C-F、PDE4C-R，所述8組引物序列具體表示如下：

ITGA2B-F(SEQ ID NO.1)：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTTAAGATTTGATTTTGGTTGGG；

ITGA2B-R(SEQ ID NO.2)：GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTATCACATACTACACATTAAACTC；