[發(fā)明專利]新型冠狀病毒環(huán)介導等溫擴增檢測芯片及制備和使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010537454.8
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111719018B
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設計）人: 常凌乾;王楊;耿佳;應斌武;樊瑜波;李為民
• 申請（專利權(quán)）人: 北京航空航天大學;四川大學華西醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京航智知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11668
• 代理人: 黃川;史繼穎

本申請?zhí)峁┝艘环N新型冠狀病毒環(huán)介導等溫擴增檢測芯片及制備和使用方法；本申請芯片中的環(huán)介導等溫擴增引物基于新型冠狀病毒的ORF1ab基因部分區(qū)域設計；微孔芯片使用激光刻蝕技術制備；本申請的芯片能夠?qū)π滦凸跔畈《具M行恒溫、快速、高通量檢測，檢測結(jié)果可直接肉眼讀取。

技術領域

本申請屬于分子生物學檢測和傳染病檢測控制領域，具體地，本申請?zhí)峁┝艘环N新型冠狀病毒環(huán)介導等溫擴增檢測芯片及制備和使用方法。

背景技術

在曾被寄予厚望的瑞德西韋、氯喹、蓮花清瘟膠囊等藥物臨床效果并不理想，疫苗研發(fā)尚需很長周期的情況下，新冠病毒感染的控制主要依賴于嚴格的物理隔離切斷病毒傳播途徑，使用隔離方法控制疾病時，及時、準確的診斷疾病/甄別感染者是快速控制疾病，并減少經(jīng)濟損失和社會影響的關鍵。

雖然有一些免疫檢測方法得到報道和應用，但目前，新型冠狀病毒的檢測仍然主要依賴于分子生物學檢測方法。我國現(xiàn)有報道的已研發(fā)或上市的分子診斷即時檢測(POCT)設備，主要是基于實時熒光PCR技術，其在臨床診斷和疑似患者排查中發(fā)揮了重要的作用，然而由于耗時長、對檢測儀器要求高(需要沉重且昂貴且需電力支持的PCR儀器)，需要集中送檢等限制，不利于開展大規(guī)模的篩查，并不能完全滿足當前即時快速的檢測需求；另一方面，由于傳統(tǒng)核酸檢測手段操作相對繁瑣，容易出現(xiàn)操作疏漏，而且新冠病毒的常見檢測樣本—咽拭子中病毒含量經(jīng)常較低，傳統(tǒng)核酸檢測手段容易出現(xiàn)遺漏感染者的假陰性問題(Huanqin Han et al.，SARS-CoV-2RNA More Readily Detected in Induced SputumThan in Throat Swabs of Convalescent COVID-19Patients，Lancet InfectDis.2020)。

綜上，研究靈敏度、特異性更好，耗時短，操作簡單地新分子生物學新冠病毒檢測方法對于控制該疾病有著重要而緊迫的意義。

發(fā)明內(nèi)容

環(huán)介導等溫擴增技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優(yōu)于PCR技術，不依賴任何專門的儀器設備實現(xiàn)現(xiàn)場高通量快速檢測，檢測成本遠低于熒光定量PCR。本發(fā)明基于環(huán)介導等溫擴增技術，通過激光蝕刻方法制備了新型冠狀病毒環(huán)介導等溫擴增檢測芯片，實現(xiàn)了對新型冠狀病毒的低成本、高通量、即時快速檢測；其中的引物基于新冠病毒的ORF1ab基因區(qū)域設計，具有良好的靈敏度和特異性。

一方面，本申請?zhí)峁┝藱z測新型冠狀病毒的環(huán)介導等溫擴增檢測芯片，其特征在于，其中包含檢測新型冠狀病毒的環(huán)介導等溫擴增引物，所述引物針對新型冠狀病毒的ORF1ab基因設計。

進一步地，其中引物針對SEQ ID NO.1設計。

進一步地，其中引物序列為：

1-F3：SEQ ID NO.2；

1-B3：SEQ ID NO.3；

1-FIP：SEQ ID NO.4

1-BIP：SEQ ID NO.5

1-LoopF：SEQ ID NO.6

1-LoopR：SEQ ID NO.7。

進一步地，其中還包含反應緩沖液和熒光染料。

進一步地，其基板材料為聚甲基丙烯酸甲酯基；所述芯片上設置有10X10排布的100個錐形孔；錐形孔上下直徑分別為2mm與5mm；所述芯片厚度為3mm。

進一步地，芯片包含BRAC1對照陽性對照區(qū)域，其中包含引物：

BRAC1 F3：SEQ ID NO.20；

BRAC1 B3：SEQ ID NO.21；