[發明專利]一種DNA采集拭子及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010537018.0
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111647505A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 楊飛宇
• 申請（專利權）人: 上海市刑事科學技術研究院
• 主分類號: C12M1/26
• 分類號: C12M1/26;C08J9/28;C08L67/04;C08L5/08;C08L1/28;C08L79/02;C08L5/04
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供一種DNA采集拭子及其制備方法和應用。所述DNA采集拭子的制備原料包括聚己內酯、親水性介質和載體；所述親水性介質包括糖類和/或非糖類有機高分子聚合物。所述DNA采集拭子以聚己內酯作為骨架，糖類和/或非糖類有機高分子聚合物作為親水性介質對聚己內酯骨架進行改性，共同復合在載體上形成拭子，形成的拭子對細胞及痕量的DNA吸附和采集效果優異，并能在后續的DNA提取步驟中釋放更多的DNA，而且不影響后續的PCR擴增，可應用于接觸性痕量DNA的檢測。

技術領域

本發明涉及生物醫用材料領域，具體涉及一種DNA采集拭子及其制備方法和應用。

背景技術

法醫DNA分析，是應用現代DNA技術分析DNA遺傳標記在群體中的分布與傳遞規律，確定分析樣品的一致性與遺傳關系，為偵查破案件和司法審判提供證據的一門科學技術。常染色體STR(短串聯重復序列)基因座是目前親權鑒定實驗室中運用最廣泛的遺傳標記，目前已經開發了很多用于法醫DNA分析的商業化STR檢測試劑盒，極大推動了偵查破案和司法審判的科學應用。但是在大量應用這些技術進行檢驗的過程中也存在現有檢測條件無法很好解決的問題，如繩索、彈殼、面罩、混合精斑等微量、降解、混合檢材的檢測，而且隨著犯罪分子作案手段的不斷提高，此類檢材在犯罪現場出現的情況也日益增多。通常情況下，使用常規檢驗技術難以得到理想實驗結果的生物檢材，而這里面難點之一是接觸性微量檢材。目前沒有一個硬性的指標將微量DNA區別于傳統的STR分型(GillBuckleton 2010)，但已有幾種不同論述對其進行定義，如由PCR反應(聚合酶鏈式反應)所檢測的DNA含量來界定，如＜100pg或＜200pg，其通過定量分析而確定。這也就是需要的細胞數目為25-50個，這還是提取效率100％的情況下，所以需要我們對接觸性痕量的樣本細胞數目為20-100的樣本需要重點關注。

而現有的采集接觸性樣本的拭子材質一般是如下幾種：1、聚酯纖維、滌綸或人造絲頭，柄部為塑料或鋁的拭子：宜用于病毒學檢驗標本的采集。2、棉拭子：宜用于支原體檢驗的陰道、宮頸及尿道標本的采集，不宜用于細菌(特別是苛養菌)、衣原體檢驗標本的采集。3、滌綸拭子和尼龍拭子：宜用于病毒和細菌標本的采樣。4、植絨拭子：由尼龍纖維經專有的噴霧技術制成，宜用于呼吸道病毒采樣和真菌培養標本的采樣。5、藻酸鈣拭子：宜用于衣原體和百日咳鮑特菌鼻咽拭子的采集，但不宜用于脂質包膜病毒及細胞培養的采樣，不宜用于淋病奈瑟菌的采樣。

上述這些不同類型的拭子有著不太一致的操作。如當使用棉簽拭子時，這些接觸性樣本上的DNA痕跡可以轉移至蘸過蒸餾水的消毒棉簽上，用濕棉簽擦拭痕跡部位，直至痕跡全轉移至棉簽上。濕、干棉簽聯用(Sweet at 1997)的所謂“雙棉簽技術”是一種最常見的采集細胞的方法。先用消毒的蒸餾水浸濕棉簽，清刷痕跡表面使細胞水化，使其從附著表面松散。隨后用干棉簽從附著表面采集額外的細胞。普遍認為再水化的細胞更容易粘附于干棉簽上。不幸的是，由于棉簽中提取DNA的效率較差，這種方法會限制DNA的回收量。棉簽拭子采集的第二個困難是細胞會粘附在棉花纖維上不易釋放出來，Voorbees 2006中提到需要用纖維酶消化棉簽，分解棉花中的纖維素，可以提高DNA的回收量。而用另一種尼龍植絨棉簽的方法與普通棉簽相對可以再采集提取過程中釋放更多的細胞而產物更多的DNA(Benschop et al.2010)。尼龍植絨棉簽的棉簽雖然可以釋放更多的DNA，但是其吸水性不佳，對細胞的粘附性不夠，因此還是會限制其在接觸性痕量DNA的采集使用。

綜上所述，對于法醫接觸性痕量DNA采集來說急需一種高性能的拭子，需要滿足如下幾點：(1)對細胞及痕量的DNA吸附和采集效果較好；(2)能在后續的DNA提取步驟中釋放更多的DNA；(3)不影響后續的PCR擴增。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種DNA采集拭子及其制備方法和應用。所述DNA采集拭子具有多孔性、親水性、細胞粘附性以及易脫附的特性。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：