[發明專利]斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟小干擾RNA組合物、試劑盒及使用方法

有效

• 申請號: 202010535694.4
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111621501B
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 邱麗華;趙超;彭超
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院南海水產研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61K9/08;A61K47/36;A61P15/08
• 代理公司: 廣州海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 高東陽;馬赟齋

1.斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟小干擾RNA組合物，其特征是，包含針對斑節對蝦CHH、MIH和VIH 3個抑制性腺發育的激素基因的小干擾RNA；所述三個小干擾RNA為CHH-siRNA、MIH-siRNA和VIH-siRNA，其中所述CHH-siRNA的正義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述MIH-siRNA的正義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述VIH-siRNA的正義鏈核苷酸序列如SEQID NO.5所示，反義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述小干擾RNA組合物中三種成分之間的質量比例為CHH-siRNA:MIH-siRNA:VIH-siRNA＝2:1:4。

2.根據權利要求1所述的斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟小干擾RNA組合物，其特征是，所述小干擾RNA組合物為CHH-siRNA、MIH-siRNA和VIH-siRNA的凍干粉混合物。

3.斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟試劑盒，其特征是，包含針對斑節對蝦CHH、MIH和VIH3個抑制性腺發育的激素基因的小干擾RNA組合物；所述三個小干擾RNA為CHH-siRNA、MIH-siRNA和VIH-siRNA，其中CHH-siRNA的正義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；MIH-siRNA的正義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；VIH-siRNA的正義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，反義鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述小干擾RNA組合物中三種成分之間的質量比例為CHH-siRNA:MIH-siRNA:VIH-siRNA＝2:1:4。

4.根據權利要求3所述的斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟試劑盒，其特征是，所述小干擾RNA組合物為凍干粉混合物。

5.根據權利要求4所述的斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟試劑盒，其特征是，在一組試劑盒中，所述小干擾RNA組合物為70μg。

6.根據權利要求4所述的斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟試劑盒，其特征是，所述試劑盒還包括終濃度為0.05mol/L的硫酸鈉溶液。

7.根據權利要求4所述的斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟試劑盒，其特征是，所述試劑盒還包括殼聚糖溶解于0.1mol/mL乙酸鈉配制的溶液，所述溶液pH＝4.5，其中殼聚糖終濃度為0.03％。

8.一種權利要求3-7任一項所述斑節對蝦雌性親蝦性腺促熟試劑盒的使用方法，其特征是，包括以下步驟：

(1)對小干擾RNA組合物4000rpm離心30s，然后每份小干擾RNA組合物加入1ml終濃度為0.05mol/L的硫酸鈉溶液，混勻；

(2)加入1ml殼聚糖乙酸鈉溶液，55℃靜置60s，轉至漩渦振蕩器振蕩30s，靜置15min；

(3)選取斑節對蝦雌性親蝦作為促熟對象，促熟實驗前避光暫養3天；

(4)按親蝦體重計算，每克親蝦于第二腹足處注射新鮮配制的工作液1μL。