[發明專利]一種編輯綿羊FGF5基因實現選擇性剪接的sgRNA、成套核酸分子和應用

有效

• 申請號: 202010533989.8
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111518812B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 李文蓉;劉明軍;李忠慧;劉晨曦;劉金瑞;瑪依拉;陳磊;徐亞芳
• 申請（專利權）人: 新疆畜牧科學院生物技術研究所（新疆畜牧科學院中國-澳大利亞綿羊育種研究中心）
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/90;C12N15/867
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 李正

1.一種編輯綿羊FGF5基因實現選擇性剪接的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA由如SEQID?No.1～SEQ?ID?No.6所示的核苷酸序列退火得到；

所述SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2兩兩退火；

所述SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4兩兩退火；

所述SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6兩兩退火。

2.一種成套核酸分子，其特征在于，包括權利要求1所述的sgRNA和lentiCRISPRv2慢病毒載體。

3.權利要求1所述的sgRNA在編輯綿羊FGF5基因中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述應用包括以下步驟：

1)將lentiCRISPRv2慢病毒載體經BsmBI酶切，得到酶切載體，將所述的sgRNA與酶切載體連接，得到重組質粒；

2)將所述步驟1)得到的重組質粒與質粒psPAX2、pMD2.G共轉染至293T細胞中，得到重組慢病毒；

3)將所述步驟2)得到的重組慢病毒感染綿羊肌細胞，實現sgRNA編輯綿羊FGF5基因。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述步驟2)重組質粒的質量、質粒psPAX2的質量、質粒pMD2.G的質量與293T細胞鋪板接種時的數量比為20μg:15μg:6μg:2～2.5×10⁶個。

6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述重組質粒與質粒psPAX2、pMD2.G通過磷酸鈣轉染法共轉染至293T細胞中。