[發(fā)明專利]一種消線法免疫層析試紙及其在CRISPR核酸檢測(cè)中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010533739.4
• 申請(qǐng)日: 2020-06-12
• 公開（公告）號(hào): CN111621598B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李浩;孫巖松;王彥賀;董雪;何雷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6804;C12N15/113;C12N9/22
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

1.一種目標(biāo)核酸檢測(cè)試劑盒，其包括如下：

1）免疫層析試紙；

所述免疫層析試紙按樣品流動(dòng)方向依次包括含有膠體金標(biāo)記抗體的樣品墊、含有T線和C線的NC膜和吸水濾紙；

所述T線由鏈霉親和素形成；

所述C線由所述膠體金標(biāo)記兔源抗FITC抗體形成；

2）CRISPR反應(yīng)體系；

所述CRISPR反應(yīng)體系的組分為：報(bào)告RNA、crRNA、LwCas13a蛋白、NTP Mix、T7 RNA聚合酶、RNA酶抑制劑、MgCl₂、HEPES緩沖液，余量為水；

所述報(bào)告RNA的兩個(gè)末端分別標(biāo)記生物素和能與所述膠體金標(biāo)記抗體結(jié)合的基團(tuán)；

所述crRNA包括所述LwCas13a蛋白結(jié)合區(qū)域和目標(biāo)核酸靶序列結(jié)合區(qū)域；

所述報(bào)告RNA由20個(gè)U組成，且所述報(bào)告RNA的兩端分別標(biāo)記生物素和熒光素；

所述膠體金標(biāo)記兔源抗FITC抗體的包被濃度為0.02mg/mL；

所述鏈霉親和素的包被濃度為1.5 mg/mL；

所述CRISPR反應(yīng)體系中含有報(bào)告RNA的濃度為2 nM；

所述crRNA在所述CRISPR反應(yīng)體系中的濃度為22.5 nM；

所述CRISPR反應(yīng)體系中含有rNTP的濃度為2 mM；

所述CRISPR反應(yīng)體系中含有RNase抑制劑的濃度為1.6 IU/μL；

所述CRISPR反應(yīng)體系中含有Cas13a蛋白的濃度為45.2nM；

所述CRISPR反應(yīng)體系中含有T7轉(zhuǎn)錄酶的濃度為1 IU/μL；

所述CRISPR反應(yīng)體系中含有MgCl₂的濃度為10 mM；

所述CRISPR反應(yīng)體系中含有HEPES的濃度為20 mM。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括用于擴(kuò)增目標(biāo)核酸的試劑；所述擴(kuò)增為等溫?cái)U(kuò)增RAA、變溫?cái)U(kuò)增PCR或等溫?cái)U(kuò)增LAMP。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：所述目標(biāo)核酸為病原體核酸、具有單核苷酸多態(tài)性的核酸或耐藥核酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于：所述病原體核酸來自于新冠病毒、埃博拉病毒或森林腦炎病毒。

5.權(quán)利要求1-4任一所述的試劑盒在制備具有如下1）-3）中至少一種功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用：

1）檢測(cè)目標(biāo)核酸是否為病原體核酸；

2）檢測(cè)目標(biāo)核酸的SNP位點(diǎn)多態(tài)性；

3）檢測(cè)目標(biāo)核酸是否為耐藥基因。