[發明專利]一種鑒定藥物靶蛋白的方法

在審

• 申請號: 202010533388.7
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111551749A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 姚亞婷;邱建閣;劉兵潔;張瀟;周風梅;江秉華
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種鑒定藥物靶蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)以細胞為樣品，加入細胞裂解液，采用液氮反復凍融法獲得細胞中的蛋白質組樣品；

(2)分別制備實驗組和對照組樣品，所述實驗組樣品為上述步驟獲得的蛋白質組樣品中加入一定體積一定濃度的藥物母液于室溫下旋轉孵育而獲得；所述對照組樣品為與實驗組等量的上述步驟獲得的蛋白質組樣品中加入與藥物母液等體積的DMSO于室溫下旋轉孵育而獲得；

(3)使用含金屬離子(Mⁿ⁺)的鹽溶液分別對實驗組和對照組樣品進行處理，其特征在于，其具體操作步驟如下：

a將上述步驟中得到實驗組和對照組樣品各平均分為n份，編號分別為E₁～E_n、V₁～V_n；

b向E₁～E_n、V₁～V_n中分別加入含Mⁿ⁺的鹽溶液，并使E₁和V₁中Mⁿ⁺終濃度為c₁mM，E₂和V₂中Mⁿ⁺終濃度為c₂mM，E₃和V₃中Mⁿ⁺終濃度為c₃mM，E_n和V_n中Mⁿ⁺終濃度為c_nmM，所述的處理后的實驗組和對照組樣品中Mⁿ⁺的終濃度c₁至c_n是呈遞增趨勢的，于室溫下旋轉孵育含Mⁿ⁺的鹽溶液處理后的E₁～E_n、V₁～V_n樣品；

c將步驟b中得到的樣品進行離心，分別收集E₁～E_n、V₁～V_n樣品的上清液，備用；或

d將步驟b中得到的樣品進行離心，分別收集E₁～E_n、V₁～V_n樣品的沉淀部分，備用；

(4)對上述步驟中得到的上清液樣品或沉淀部分樣品進行蛋白質定量檢測分析，得到樣品中蛋白質的定量結果；和

(5)對上述步驟中的測定數據進行分析評價，其特征在于，根據蛋白質定量結果繪制出各個蛋白質的溶解度曲線，其中實驗組和對照組的溶解度曲線有顯著性差異的蛋白質即是鑒定到的藥物靶蛋白。

2.根據權利要求1所述的一種鑒定藥物靶蛋白的方法，其特征在于，所述細胞優選地為人腫瘤細胞。

3.根據權利要求1所述的一種鑒定藥物靶蛋白的方法，其特征在于，所述細胞裂解液包括：緩沖溶液、(非離子型、離子型)表面活性劑、蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑中的一種或幾種。

4.根據權利要求1所述的一種鑒定藥物靶蛋白的方法，其特征在于，所述液氮反復凍融法其具體步驟為：

a收集細胞，加入預冷的裂解液在冰上裂解30min；

b將a中得到的細胞裂解液轉移至液氮中快速冷凍；

c取出b中的樣品迅速放入37℃水浴，待大部分(約60％)的樣品解凍后轉移至冰上至完全解凍；

d重復步驟b～c兩次，在10800g、4℃條件下離心20min，取上層清液即得到細胞中的蛋白質組樣品。

5.根據權利要求1所述的一種鑒定藥物靶蛋白的方法，其特征在于，所述藥物優選地為抗腫瘤藥物或小分子抑制劑；所述的藥物母液為藥物溶解于DMSO中所得的溶液；優選地，所述藥物母液的濃度為0～1M。