[發明專利]一種基于釩酸銀/釩酸銦的電化學發光傳感器制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010532444.5
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111830100B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 吳丹;薛經緯;魏琴;趙磊;馬洪敏
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N27/48;G01N21/76
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 趙鳳

本發明涉及一種基于釩酸銀/釩酸銦納米復合材料的電化學發光傳感器制備方法及應用，屬于電化學發光檢測技術領域。開發并首次驗證了四苯乙烯納米簇與氧化銅納米球能量轉移對在低電位下可達到的高效電化學發光猝滅的行為。這一發現，一方面解決了發光材料在電極上的固定問題，另一方面解決了有效調節發光強度的問題。根據對不同濃度的原降鈣素響應的電化學發光信號強度不同，實現對原降鈣素的檢測。通過采用F檢驗、T檢驗展示本方法的準確度和精密度，測試結果均小于理論值，說明該方法準確可靠。

技術領域

本發明涉及一種基于四苯乙烯納米簇作為低電位電化學發光發射器并固載在釩酸銀/釩酸銦納米棒上，棒狀結構加速了電子的傳遞，棒上分布的顆粒也增加了發光材料固定的位點，以氧化銅納米球作為猝滅探針，兩者發生能量轉移的傳感器制備及應用。具體是采用四苯乙烯納米簇作為發光材料，氧化銅納米球作為猝滅探針，并且采用多肽鏈實現對抗體的定向固定，實現了在-1.15 V的低電位激發，有效保護了蛋白質的活性，也提高對免疫物質檢測的可行性。綜上制備的一種檢測原降鈣素的猝滅型電化學發光傳感器，屬于電化學發光檢測技術領域。

背景技術

SIRS指全身炎癥反應即機體對多種細胞因子/炎癥介質的反應，目前尚無明顯的治療方法。因此，原降鈣素作為血清中SIRS的典型生物標志物，對SIRS的早期準確可靠診斷起著至關重要的作用。

目前對原降鈣素的分析檢測方法有很多。比如：放射免疫分析法、酶聯免疫分析法等。但是存在所用的試劑有效期短，具有放射性污染，檢測周期長，靈敏度低，步驟繁瑣等諸多缺點。為了克服這些缺點，本發明設計了一種特異性強、靈敏度高、無放射性污染、操作快速簡便的電致化學發光免疫分析方法。

電化學發光兼有電化學和化學發光兩者的交叉滲透，因此同時具備發光分析的超高靈敏度與電化學電位可控的優點，所以引起了分析化學等諸多領域的高度重視。傳統的發光材料雖然具有優秀的發光效果但難以穩定固載于電極表面，然而許多新型的發光體，例如硫化鎘等鎘基材料卻有很高生物毒性或者必須施加高電位激發。因此，無毒、低電位激發且電極固載性好的發光材料成為了研究的重點。本發明以釩酸銀/釩酸銦納米棒作為基底固載四苯乙烯納米簇，以氧化銅納米球作為猝滅探針，構建了一種猝滅型的電致化學發光傳感器用于原降鈣素的檢測。

發明內容

本發明的目的是針對現有傳感器的發光材料發光效率優秀但毒性大或難于固載于電極表面等缺點提供一種適合的新型發光材料，并且針對現有的全身炎癥反應綜合癥的檢測方法存在的問題，提供一種新穎的基于氧化銅猝滅四苯乙烯納米簇的電致化學發光免疫傳感器的制備并實行對實際樣品的檢測應用，實現對全身炎癥反應綜合癥的疾病標志物的快速、靈敏、特異、高效檢。整個方法的投入能耗低，獲得的效果理想，具有良好的應用前景。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

1. 一種基于釩酸銀/釩酸銦納米復合材料的電化學發光傳感器制備方法及應用，其特征在于，包括以下步驟：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化鋁粉末對玻碳電極進行拋光，在超純水和乙醇中超聲清洗，氮氣吹干；

（2）在處理好的電極表面滴加6 μL、濃度為0.5~5 mg/mL的四苯乙烯納米簇分散液作為傳感基底材料，4 °C下晾干成膜；

（3）加入3~8 mM巰基乙酸在4 °C下浸泡5 h后轉入EDC/NHS混合體系中浸泡30 min來活化羧基；

（4）繼續在4 °C條件下浸泡濃度為5~15 μg/mL的原降鈣素抗體1 h，用pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液洗凈電極表面，4°C下晾干；

（5）在質量濃度為1~3%的牛血清白蛋白中浸泡來封閉非特異性活性位點，用pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液沖洗電極表面，常溫下晾干；