[發明專利]一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法

在審

• 申請號: 202010532335.3
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111721861A
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 董浩;冼燕萍;吳金濤;黃俊源;吳玉鑾;梁明;李海霞;曾曉房;白衛東
• 申請（專利權）人: 仲愷農業工程學院;廣州質量監督檢測研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 姜娜

本發明屬于農產質量安全檢測技術領域，公開了一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法。配置加入同位素內標MeIQx?d₃和Norharman?d₇的雜環胺標準溶液，取臘味樣品依次經NaOH溶液?乙腈均質提取、NaCl鹽析除雜前處理，得到提取液，然后經Strata^TM?X?C柱凈化，得到待測液；將臘味樣品加入到標準溶液中，經提取凈化，得到基質加標溶液。將基質加標溶液和待測液采用HPLC?Q?Orbitrap HRMS分別進樣檢測，制作基質標準曲線，根據基質標準曲線結合內標法計算待測液中各雜環胺含量。本發明方法靈敏度高、準確可靠、選擇性和特異性好，可克服臘味樣品基質干擾。

技術領域

本發明屬于農產質量安全檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法。

背景技術

雜環胺是肉制品在煎、炸、烤等熱處理加工過程中常產生的一種具有強致癌性、致突變性以及心肌毒性物質。肉制品中雜環胺的形成受到加工方式、加熱溫度和時間、脂質種類等多種因素的影響，其中溫度和時間是影響雜環胺種類和含量的主要因素。溫度低于150℃，雜環胺形成較少；溫度高于200℃，其形成顯著增加；其中Harman和Norharman甚至在100℃以下即可形成。

臘味主要包括臘腸、臘肉等肉制品，風味獨特，富含脂肪和蛋白質，在中國已有幾千年的歷史，深受消費者喜愛。臘味一般是肉經腌制后再經過烘烤(或日光下暴曬)等加工工藝所制成的加工品，然而，這一過程也極容易產生雜環胺等安全風險。因此，開發臘味等肉制品中雜環胺的高通量檢測方法對于臘味產業的健康發展和消費者的營養健康具有非常重大的現實意義。

目前，肉制品中雜環胺的檢測方法有氣相色譜法、氣相色譜-質譜法、高效液相色譜法、液相色譜-質譜/質譜法等。然而，大多數雜環胺屬于極性和低揮發性化合物，在氣相色譜和氣相色譜-質譜分析中，很容易吸附于色譜柱和進樣器上，出現峰展寬和拖尾等峰形惡化問題，且在低濃度時雜環胺不易被檢出，因此常需將樣品經過復雜的衍生化步驟后才能測定，導致前處理過程比較復雜；液相色譜法是最常見的分析方法，但選擇性差，靈敏度也達不到要求。應用液相色譜-質譜/質譜檢測時無需進行衍生化，操作簡單、省時，靈敏度高，可以達到在目標范圍內雜環胺的測定，目前應用較多，但已報道的文獻中大多采用該技術測定已知的雜環胺類化合物。

發明內容

針對以上現有技術存在的缺點和不足之處，本發明的目的在于提供一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法。本發明采用高效液相色譜-四級桿-靜電場軌道肼高分辨質譜(HPLC-Q-Orbitrap HRMS)檢測方法。與上述傳統檢測方法相比，本方法中的Orbitrap HRMS具有高質量分辨率和高靈敏度，能提供精確相對分子質量，在全掃描模式下采集的數據可以根據檢測需求反復調用，其數據依賴性掃描可以獲得高質量的二級碎片質譜圖，實現對未知風險物質的非定向篩查和對已知風險物質的準確定性，由此可彌補傳統低分辨質譜方法(液相色譜-質譜/質譜法)只能測定已知雜環胺類化合物的局限性。

本發明目的通過以下技術方案實現：

一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法，包括如下檢測步驟：

(1)標準溶液的配制：將待測雜環胺標準品用甲醇配制成每個標準品濃度均為1.0mg/L的雜環胺混合標準溶液，然后用流動相配制成濃度分別為0.2μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L的混合標準工作液，每個濃度的標準工作液中含有各20μg/L的同位素內標MeIQx-d₃和Norharman-d₇；所述流動相為體積比為95/5的1mmol/L乙酸銨溶液與乙腈的混合溶液，其中乙酸銨溶液中含0.05wt.％甲酸；