[發明專利]一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法

在審

• 申請號: 202010532335.3
• 申請日: 2020-06-12
• 公開（公告）號: CN111721861A
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 董浩;冼燕萍;吳金濤;黃俊源;吳玉鑾;梁明;李海霞;曾曉房;白衛東
• 申請（專利權）人: 仲愷農業工程學院;廣州質量監督檢測研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 姜娜

1.一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法，其特征在于包括如下檢測步驟：

(1)標準溶液的配制：將待測雜環胺標準品用甲醇配制成每個標準品濃度均為1.0mg/L的雜環胺混合標準溶液，然后用流動相配制成濃度分別為0.2μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L的混合標準工作液，每個濃度的標準工作液中含有各20μg/L的同位素內標MeIQx-d₃和Norharman-d₇；所述流動相為體積比為95/5的1mmol/L乙酸銨溶液與乙腈的混合溶液，其中乙酸銨溶液中含0.05wt.％甲酸；

(2)樣品提取：取臘味樣品加入到NaOH溶液和乙腈的混合溶液中，均質提取，然后加入NaCl鹽析除雜，離心，取下層殘渣再加入乙腈萃取一次，合并上層溶液，濃縮，得到提取液；

(3)樣品凈化：預先依次用甲醇、蒸餾水、1wt.％甲酸溶液將Strata^TM-X-C柱活化和平衡，將提取液全部通過Strata^TM-X-C柱，依次用0.1wt.％甲酸溶液、水和甲醇淋洗，再用甲醇-氨水混合液洗脫，洗脫液經氮氣吹干，用1.0mL流動相定容，過濾，得到待測液；所述流動相為體積比為95/5的1mmol/L乙酸銨溶液與乙腈的混合溶液，其中乙酸銨溶液中含0.05wt.％甲酸；

(4)基質加標溶液制備：取臘味樣品分別加入到步驟(1)不同濃度的混合標準工作液中，然后經步驟(2)和步驟(3)進行提取凈化，得到基質加標溶液；

(5)檢測分析：將步驟(4)的基質加標溶液和步驟(3)的待測液采用HPLC-Q-OrbitrapHRMS分別進樣檢測，制作基質標準曲線，根據基質標準曲線結合內標法計算待測液中各雜環胺含量；

檢測過程HPLC條件為：

色譜柱為ThermoAccucore aQ C18；柱溫：30℃；流動相：A相，含0.05wt.％甲酸的1mmol/L乙酸銨溶液；B相：乙腈；梯度洗脫程序：0～0.5min，95％A；0.5～7min，95％A～80％A；7～9.5min，80％A～40％A；9.5～9.6min，40％A～5％A；9.6～11min，5％A；11～11.5min，5％A～95％A；11.5～13min，95％A；進樣量：3μL；流速：0.3mL/min；

Q-Orbitrap HRMS條件為：

采用配有HESI離子源的Q Exactive Focus質譜系統，正離子模式，噴霧電壓為3.5kV，毛細管和噴霧溫度分別為320℃和250℃；鞘氣和輔助氣壓力分別設為45arb和8arb，S-lensRF電壓為50V；噴霧氣和碰撞氣均為氮氣；掃描方式采用正離子Full MS模式；Full MS一級全掃描范圍為m/z 50～650，分辨率為70000，自動增益控制AGC、自動注入時間IT分別設為1.0e⁶和100ms；dd-MS2數據依賴的二級掃描AGC設為1.0e⁵，分辨率設為17500，最大IT設為60ms，分離窗口設為2.0m/z，各化合物的歸一化碰撞能量(NCE)設為80％、100％、120％，動態排除設為8s。

2.根據權利要求1所述的一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法，其特征在于：步驟(1)中所述待測雜環胺包括DMIP、IQx、IQ、MeIQ、MeIQx、7,8-DiMeIQx、4,8-DiMeIQx、Norharman、Harman、Trp-P-2、PhIP、Trp-P-1、AaC和MeAaC這14種雜環胺。

3.根據權利要求1所述的一種同時檢測臘味中多種雜環胺的方法，其特征在于：步驟(2)和步驟(4)中所述臘味樣品取樣量為1.0g，所述NaOH溶液和乙腈的混合溶液是指4mL1mol/LNaOH溶液和6mL乙腈的混合溶液；所述均質提取時間為30s；所述NaCl的加入量為1.5g；所述離心是指在4500r/min離心5min；所述萃取殘渣的乙腈加入量為4mL；所述濃縮是指用40℃氮氣吹至溶液體積為2mL。