[發明專利]一種無血清的脂肪間充質干細胞的培養基及細胞培養方法

有效

• 申請號: 202010530455.X
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111808803B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 楊桂花;趙進軍;趙宇飛
• 申請（專利權）人: 和攜科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 趙萬凱

1.一種無血清的脂肪間充質干細胞的培養基，其特征在于，所述培養基包括基礎培養基和血清替代物，所述血清替代物的添加量為基礎培養基質量的3.5~4.5%，所述血清替代物包括以下組分，各組分的終濃度分別為：

人血清蛋白1~1.5 g/L；白蛋白153~208 mg/L；轉鐵蛋白8~12 mg/L；纖粘連蛋白4~7mg/L；層粘連蛋白2~9 mg/L；雌二醇2~4 μg/L；維生素B₂ 256~261 mg/L；輔酶A 150~167mg/L；維生素B₁₂ 187~249 mg/L；牛磺酸1.8~3 mg/L；丙酮酸7.23~29.42 mg/L；西那卡塞35.74~71.48 ng/L；血管內皮生長因子4~12 μg/L；血管內皮生長因子2型受體5~14 μg/L；表皮生長因子5~12 μg/L；血小板衍生生長因子120~150 μg/L；堿性成纖維細胞生長因子5~14 μg/L；促紅細胞生成素0.5~0.8 μg/L；胰島素樣生長因子5~8 μg/L；胰島素2~4.5 mg/L；重組人生長激素21~34 mg；蛋白酶抑制劑2~3.6 μg/L；胰酶抑制劑0.3~0.8 mg/L；L-谷氨酰胺321~436 mg/L；轉化生長因子-α 1~4 μg/L；轉化生長因子-β 1~4 μg/L；白細胞介素211.5~3.5 μg/L；造血細胞生長因子1~2.5 μg/L；

所述血清替代物還包括抗炎抗敏物質，所述抗炎抗敏物質包括：地塞米松0.36~1.09mg/L；重組人TSG-6蛋白2~5 mg/L。

2.根據權利要求1所述的一種無血清的脂肪間充質干細胞的培養基，其特征在于，所述基礎培養基為DMEM/F12。

3.一種利用權利要求1-2任一所述的無血清的脂肪間充質干細胞的培養基的細胞培養方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

S1將血清替代物加入基礎培養基中，制成含質量分數為3.5~4.5%的無血清的脂肪間充質干細胞的培養基；

S2 將消化人脂肪組織后得到的收集細胞接種在所述無血清的脂肪間充質干細胞的培養基中培養72 h即可。

4.根據權利要求3所述的一種利用無血清的脂肪間充質干細胞的培養基的細胞培養方法，其特征在于，所述收集細胞的細胞密度為（1~2）×10⁶個/mL。

5.根據權利要求3所述的一種利用無血清的脂肪間充質干細胞的培養基的細胞培養方法，其特征在于，所述人脂肪組織的消化步驟包括：

取20 mL的質量分數為0.25%的胰酶液加入到30 mL的生理鹽水中并混勻，得到消化液；

于細胞匯合度達到80%以上的脂肪組織中加入所述消化液，使得消化液充分浸潤細胞液；

待鏡下觀察細胞變圓后，再加入所述消化液，均勻浸潤細胞面后終止消化；

將細胞懸液離心，隨后棄上清液，震散細胞沉淀即可。