[發明專利]一種用于生鮮奶品質評價的標記物

在審

• 申請號: 202010529186.5
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111551657A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 楊永新;吳濤;趙小偉;齊云霞;黃冬維;丁海生;程廣龍;趙輝玲;韓榮偉
• 申請（專利權）人: 安徽省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 合肥信誠兆佳知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 34159
• 代理人: 尉敏

1.一種用于生鮮奶品質評價的標記物，其特征在于，所述標記物為天青殺素1。

2.一種如權利要求1所述標記物在評價生鮮奶品質和/或奶牛乳腺感染狀況中的應用。

3.一種如權利要求1所述標記物用于生鮮奶品質和/或奶牛乳腺感染狀況評價的方法，其特征在于，取待測牛奶樣品，提取樣品乳清蛋白，對所得乳清蛋白進行酶解，然后采用液相色譜串聯質譜法檢測其中所述標記物的含量以判斷生鮮奶品質和/或奶牛乳腺感染狀況。

4.根據權利要求3所述方法，其特征在于，當天青殺素1的相對含量小于等于10⁶，則奶牛健康，生鮮奶品質優；當天青殺素1的相對含量大于10⁶小于等于10⁷，則奶牛可能患有隱性乳房炎，生鮮奶品質合格；當天青殺素1的相對含量大于10⁷，則奶牛患有乳房炎，生鮮奶品質不合格。

5.根據權利要求3所述方法，其特征在于，液相色譜串聯質譜法檢測的具體操作如下：采用質量分數為0.1％的甲酸溶液溶解酶解的肽段，然后注入液相色譜儀進行測定，色譜流出液注入質譜儀進行質譜檢測。

6.根據權利要求3所述方法，其特征在于，液相色譜條件如下：以質量分數為0.1％的甲酸水溶液為流動相A，以質量分數為0.1％的甲酸水溶液與乙腈按體積比為5：95混合液為流動相B，流速為300nL/min，梯度洗脫。

7.根據權利要求3所述方法，其特征在于，質譜檢測條件如下：噴霧電壓為2.3kV，離子傳輸管溫度為275℃，S-Lens射頻為55％；全掃描范圍為300-2000m/z，全掃描分辨率為30000@m/z400，離子最大注入時間為200ms，AGC為1E6，碰撞能量為30％；二級掃描分辨率為15000@m/z400，離子最大注入時間為100ms，AGC為1E4。

8.根據權利要求3所述方法，其特征在于，牛奶樣品提取乳清蛋白的具體步驟如下：取待測牛奶樣品，在2500-4000×g，4-6℃條件下離心15-40min，收集中間乳清層，調節乳清的pH值至4.6，然后在10000-15000×g 4-6℃條件下離心10-30min，收集上層清液，得到乳清蛋白。

9.根據權利要求3所述方法，其特征在于，對所得乳清蛋白進行酶解的具體操作如下：向所得乳清蛋白中加入濃度為50-100mmol/L的二硫蘇糖醇，再加入濃度為50-100mmol/L碘乙酰胺溶液，室溫避光，接著加入胰蛋白酶溶液，乳清蛋白與胰蛋白酶質量比為25-80：1在37℃過夜，再加入甲酸溶液，接著12000-14000×g，離心20-40min，取上層液進行干燥得到酶解肽段。