[發明專利]檢測AML預后相關基因突變的引物組合物、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010529086.2
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN111560438A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 辛秋紅;王潔;吳建成;張亞飛
• 申請（專利權）人: 邁杰轉化醫學研究（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.檢測AML預后相關基因突變的引物組合物，其特征在于，所述引物組合物包括以下引物對中的任意一種或至少兩種的組合：

(1)檢測FLT3-ITD突變的引物對：

SEQ ID NO:1：ACTCATCATTTCATCTCTGAAGCA；

SEQ ID NO:2：GCATCTTTGTTGCTGTCCTTCCA；

(2)檢測FLT3-TKD突變的引物對：

SEQ ID NO:3：GCACTCCAGGATAATACACATCACA；

SEQ ID NO:4：TCTTCGTGATATCCCCTGACAACATAGTTGGAATC；

(3)檢測NPM1突變的引物對：

SEQ ID NO:5：TTTTTTCCAGGCTATTCAAGATCTCTG；

SEQ ID NO:6：

TTTCTTAGGTCAGGACAGCCAGATATCAACTGTTACAGAAATGA；

(4)檢測CEBPA突變的引物對：

SEQ ID NO:7：GCGGGCGAGCAGGGTCTC；

SEQ ID NO:8：CGCGCCCGGGTAGTCAAAGT；

SEQ ID NO:9：GCGACTTTGACTACCCGGGC；

SEQ ID NO:10：CGGGCTGCAGGTGCATGGT；

SEQ ID NO:11：GGCCAGACCACCATGCACCT；

SEQ ID NO:12：CCGGCGACCCCAAACCACT。

2.根據權利要求1所述的引物組合物，其特征在于，所述引物對的上游引物的5’端修飾有熒光基團；

優選地，所述熒光基團包括FAM、HEX、TET、JOE、CY3、VIC或CY5中的任意一種。

3.一種檢測AML預后相關基因突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1或2所述的引物組合物；

優選地，所述試劑盒還包括DNA聚合酶、限制性核酸內切酶、dNTPs或PCR預混液中的任意一種或至少兩種的組合；

優選地，所述限制性內切酶包括EcoR V；

優選地，所述試劑盒還包括陰性質控品和/或陽性質控品。

4.一種檢測AML預后相關基因突變的裝置，其特征在于，所述裝置包括PCR混合液配制單元、PCR反應單元、酶切單元、毛細管電泳檢測單元中的任意一種或至少兩種的組合。

5.根據權利要求4所述的裝置，其特征在于，所述PCR混合液配制單元用于將待測DNA模板、PCR引物和PCR預混液混合，得到PCR混合液；

優選地，所述PCR引物包括權利要求1或2所述的引物組合物；

優選地，所述PCR混合液的反應體系包括300～500ng DNA模板和1～10μM PCR引物；

優選地，所述DNA模板來源于手術切除組織、石蠟包埋組織、胸水、骨髓液、全血、口腔黏膜或胸腔積液中的任意一種或至少兩種的組合。

6.根據權利要求4或5所述的裝置，其特征在于，所述PCR反應單元用于進行多重PCR擴增反應，得到PCR擴增產物；

優選地，所述PCR擴增反應的條件為92～96℃預變性1～2min；95～98℃變性5～20s，65～68℃退火40～60s，共進行30～40個循環；65～70℃延伸20～30min；0～4℃終止反應。

7.根據權利要求4-6任一項所述的裝置，其特征在于，所述酶切單元用于對PCR擴增產物進行酶切處理；

優選地，所述酶切處理的條件為30～40℃下孵育1～5h；

優選地，所述毛細管電泳檢測單元用于對PCR擴增產物和/或酶切產物進行毛細管電泳檢測。

8.一種檢測AML預后相關基因突變的方法，其特征在于，所述方法采用權利要求1或2所述的引物組合物、權利要求3所述的試劑盒或權利要求4-7任一項所述的裝置對待測DNA模板進行PCR擴增，并對PCR擴增產物進行測序檢測或電泳檢測。