[發明專利]一種利用無機硒制備富硒屎腸球菌的方法及其應用

在審

• 申請號: 202010528777.0
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN113106030A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 趙敏孟;于潔;劉龍;耿拓宇;龔道清
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/18;A23K20/20;A23K50/75;C12R1/01
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

本發明提供一種利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法，所述方法包括：(1)準備屎腸球菌菌種、屎腸球菌培養基、亞硒酸鈉；所述屎腸球菌培養基包括屎腸球菌固體培養基、屎腸球菌液體培養基；(2)向屎腸球菌液體培養基中加入亞硒酸鈉，溶解，過濾，制備得到富硒培養基；(3)活化屎腸球菌菌種，將活化后的屎腸球菌以5％?10％比例加入富硒培養基中，37℃厭氧條件下在恒溫搖床中培養24小時，培養物離心，雙蒸水洗滌所得沉淀，真空冷凍干燥，制備得到富硒屎腸球菌制劑。富硒屎腸球菌制劑改善動物的腸道健康和機體免疫力，提高動物生產性能，而且可用于生產富硒蛋等，有利于增加畜禽產品的附加值，提高飼養者的經濟收益。

技術領域

本發明屬于微生物制劑生產技術領域。具體涉及一種利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法及其應用。

背景技術

研究表明，在飼糧中添加有益腸道菌，對動物有諸多益處。一方面，有益腸道菌可以改善腸道內的菌群結構，增加有益菌的豐度，同時降低有害菌、條件性致病菌的豐度。另一方面，添加的有益腸道菌或添加有益腸道菌所誘發增加的有益菌可產生改善腸道結構、促進營養吸收的代謝物。與之相反，有害腸道菌及其代謝物則損傷腸道的結構與功能，增加進入宿主體內的細菌和毒物，引起免疫和炎癥反應、營養吸收受阻等不利影響，造成動物發生疾病以及降低家養畜禽的生產性能。

在有益腸道菌中，乳酸桿菌、丁酸梭菌和芽胞桿菌是較常用的有益腸道菌，不過，它們可能對腸道健康與功能的效應不同。屎腸球菌為圓形或橢圓形，呈單個、成對或短鏈狀排列，無芽孢、無鞭毛，是需氧或兼性厭氧的革蘭氏陽性球菌。相較于雙歧桿菌、乳桿菌等嚴格厭氧菌，屎腸球菌易于生產保存。腸球菌可產生大量乳酸，抑菌作用強，是目前市場上最常見的乳酸菌。有研究表明屎腸球菌添加到豬飼料中，可以減少斷奶仔豬的腹瀉，提高仔豬生長性能，減少腸道黏膜的氧化應激，維護腸道黏膜的屏障功能。在肉雞日糧中添加屎腸球菌，可以在一定程度上降低死淘率，并促進免疫器官的發育，提高血清和肝臟中T-AOC和GSH-Px活性，降低血清中MDA含量，增加抗氧化酶活性，改善肉雞的抗氧化應激能力。在蛋雞日糧中添加屎腸球菌，可以提高產蛋率1.7％-4.7％，而破蛋率和料蛋比分別降低0.4％和2％-6％。平均蛋重、蛋殼強度和哈氏單位等蛋品質指標也呈上升趨勢。對產蛋后期的蛋雞而言，添加屎腸球菌能提高蛋雞的平均蛋重、蛋料比和產蛋率，且降低雞糞中氨氣的產生量。在奶牛飼料中添加屎腸球菌，能提高泌乳量8％，降低干物質的采食量，提高飼料粗脂肪的表觀消化率，有利于飼料的轉化和利用，以及降低牛奶中體細胞的總數量。

硒是人和動物所必需的微量元素，硒具有重要的生理作用，在提高免疫力，調節新陳代謝，預防癌癥等方面，均有著顯著的作用。尤其在增強免疫力方面，適量的硒可調節機體對維生素的吸收，增加機體免疫球蛋白的生成。硒也具有抗氧化能力，是谷胱甘肽過氧化物酶的活性中心元素，能夠清除人和動物體內的自由基，防止細胞膜被氧化而受損，具有抗衰老的功效。研究表明，硒可有效提高動物機體內的吞噬細胞數量，影響特異性效應細胞游走趨化和吞噬細胞的殺菌活力，調節B淋巴細胞、T淋巴細胞、自然殺傷性細胞(NK)和中性粒細胞的功能，從而增強了動物機體的細胞免疫能力。在動物體中硒和維生素E有著復雜的補償和協調的作用，可以減少細胞膜對維生素E的需求量，提高動物體對維生素E和其他營養物質的吸收利用率。硒元素在自然界有兩種存在方式：有機硒和無機硒。無機硒通常指亞硒酸鈉和硒酸鈉。但無機硒不易被人和動物吸收，毒性較高，容易污染。和無機硒相比，有機硒擁有使用安全性高、發生中毒率低、人體和動物體吸收轉化率高、營養價值更高等特點。有機硒通常以硒核酸、硒蛋白、硒多糖、硒代蛋氨酸等形式存在。利用微生物的自我快速復制能力，將無機硒轉化成菌體中的有機硒，目前也是生產有機硒的一種廉價有效方法。

由于硒和屎腸球菌對動物的諸多好處，生產富硒屎腸球菌并將其添加到飼料中可使同一產品具有硒和腸道有益菌的雙重益處。生產富硒的屎腸球菌已成為未來添加劑的研究方向之一。目前生產的富硒菌主要有富硒酵母、富硒乳酸菌、富硒糞腸球菌。然而，富硒屎腸球菌的生產尚未見報道。

發明內容