[發明專利]一種利用無機硒制備富硒屎腸球菌的方法及其應用

在審

• 申請號: 202010528777.0
• 申請日: 2020-06-11
• 公開（公告）號: CN113106030A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 趙敏孟;于潔;劉龍;耿拓宇;龔道清
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K10/18;A23K20/20;A23K50/75;C12R1/01
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

1.一種利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)準備屎腸球菌菌種、屎腸球菌培養基、亞硒酸鈉；所述屎腸球菌培養基包括屎腸球菌固體培養基、屎腸球菌液體培養基

(2)向步驟(1)制備得到的屎腸球菌液體培養基中加入亞硒酸鈉，溶解，采用20μm過濾膜過濾，制備得到富硒培養基；

(3)采用步驟(1)制備得到的屎腸球菌固體培養基活化屎腸球菌菌種，將活化后的屎腸球菌菌液按體積比5％-10％的比例加入富硒培養基中，培養，培養物離心，雙蒸水洗滌所得沉淀，并真空冷凍干燥，制備得到富硒屎腸球菌制劑；優選的，將活化后的屎腸球菌菌液按體積比10％加入富硒培養基中。

2.根據權利要求1所述的利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法，其特征在于，步驟(1)所述屎腸球菌培養基為MRS培養基。

3.根據權利要求1所述的利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法，其特征在于，步驟(1)所述屎腸球菌固體培養基為MRS瓊脂培養基，將MRS瓊脂培養基粉末、蒸餾水以質量比66.2:1000混合，121℃高壓滅菌15分鐘制備得到；

所述屎腸球菌液體培養基為MRS肉湯培養基，將MRS肉湯培養基粉末、蒸餾水以質量比52.4:1000混合，121℃高壓滅菌15分鐘制備得到。

4.根據權利要求1所述的利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法，其特征在于，步驟(2)所述富硒培養基中硒濃度為5-20μg/mL，優選的，所述富硒培養基中硒濃度為10μg/mL。

5.根據權利要求1所述的利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法，其特征在于，步驟(3)所述的活化屎腸球菌菌種具體為：所述屎腸球菌菌種為屎腸球菌活菌干粉，取出屎腸球菌凍干管，將無菌水注入凍干管中，吸取菌懸液，涂布于屎腸球菌固體培養基平板上，在37℃、厭氧條件下培養24小時，活化成功后，傳代1-2次，得到活化后的屎腸球菌。

6.根據權利要求1所述的利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法，其特征在于，步驟(3)所述培養條件為37℃厭氧條件下培養24小時，所述離心為將培養物以4000r/min離心15分鐘；所述離心與洗滌步驟重復3次。

7.根據權利要求1所述的利用無機硒制備富硒屎腸球菌制劑的方法，其特征在于，步驟(3)所述真空冷凍干燥時間為48小時。

8.采用權利要求1至7任意項權利要求所述方法制備得到的富硒屎腸球菌制劑。

9.權利要求8所述富硒屎腸球菌制劑在提高畜禽生長性能和/或改善畜禽腸道健康和/或改善畜禽機體免疫力和/或提高畜禽的生產能力中的應用。

10.權利要求8所述富硒屎腸球菌制劑在在動物飼料添加劑中的應用，其特征在于，所述動物飼料添加劑為蛋雞或肉雞飼料添加劑。