[發(fā)明專利]一種基于TP0136基因異質(zhì)性用于區(qū)分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010526821.4 | 申請日： | 2020-06-09 |
| 公開（公告）號： | CN111593132A | 公開（公告）日： | 2020-08-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 柯吳堅;魏然;塔依爾·吐爾洪 | 申請（專利權(quán)）人： | 柯吳堅 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海思牛達專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 31355 | 代理人： | 丁劍 |
| 地址： | 510009 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 tp0136 基因 異質(zhì)性 用于 區(qū)分 梅毒 螺旋體 不同 分子 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種基于TP0136基因異質(zhì)性用于區(qū)分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，涉及一種對梅毒螺旋體不同菌株的分子分型方法，所述方法利用梅毒螺旋體屬TP0136蛋白異質(zhì)性建立。本發(fā)明方法通過檢測梅毒螺旋體不同菌株TP0136基因異質(zhì)性，用于區(qū)分梅毒螺旋體不同亞型，彌補了梅毒分子分型檢測方法的不足；具有檢測結(jié)果確切、靈敏度高的特點，易于推廣。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種對梅毒螺旋體不同菌株的分子分型方法，具體涉及一種基于TP0136基因異質(zhì)性用于區(qū)分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法。
背景技術(shù)
梅毒是由梅毒螺旋體感染所致的一種性傳播疾病，位居我國乙類傳染病第三位。梅毒螺旋體的先天傳播是發(fā)展中國家導(dǎo)致胎兒和圍產(chǎn)兒死亡的首要因素。梅毒螺旋體感染引起的早期黏膜損害(硬下疳)為HIV提供進入人體門戶，使感染和傳播HIV的危險性增加，對公眾健康造成嚴重威脅。因此，有效防控梅毒螺旋體感染迫在眉睫。梅毒螺旋體分子分型系統(tǒng)不僅是開展梅毒分子流行病學(xué)研究的重要手段，有助于闡述基因型別與菌株的毒力、侵襲性之間的關(guān)系，而且可以評價基因型別與病程分期、疾病結(jié)局以及臨床耐藥之間的關(guān)系，為制定梅毒螺旋體防治策略及其效果評價提供依據(jù)。
美國疾控中心研究團隊根據(jù)梅毒螺旋體菌株間arp基因重復(fù)片段個數(shù)差異，將arp具有分為以2～22共21個亞型；根據(jù)tpr EGJ基因酶切后RFLP圖譜，將tpr 分為a～p共16個亞型，創(chuàng)立了梅毒螺旋體分子分型方法，俗稱CDC分型。隨后， Marra等根據(jù)TP0548基因異質(zhì)性采用測序技術(shù)，將TP0548基因分為a～i共9個亞型。Katz等根據(jù)rpsA基因G重復(fù)數(shù)目差異，將rpsA分為8～11共4個亞型。由于rpsA分型效率不佳，因此目前更多研究團隊選擇將CDC和TP0548分型法結(jié)合起來，稱為新的分型方法。近年來，研究者對多個可變位點進行分析，試圖選取TP0279、TP0558、TP0326等新的基因位點用于臨床鑒別，但分型效率均不理想。因此，現(xiàn)有的梅毒螺旋體分型方法不僅無法滿足臨床梅毒診斷需求，而且無法區(qū)分我國近90％梅毒感染者中梅毒螺旋體分子型別，無法準確的用于我國梅毒分子流行病學(xué)研究及用于臨床評估，臨床迫切需要一種更有效的梅毒螺旋體分子分型方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速、準確、簡便、適于區(qū)分梅毒螺旋體不同菌株的分子分型方法，以便于梅毒螺旋體感染的鑒別診斷和分子流行病學(xué)研究。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，在梅毒螺旋體不同菌株中TP0136存在基因異質(zhì)性。利用這一特點，本文通過研究梅毒螺旋體不同菌株中TP0136基因異質(zhì)性，建立一種新的梅毒螺旋體分子分型方法。本發(fā)明利用梅毒螺旋體不同菌株TP0136存在的基因異質(zhì)性，基于分子生物學(xué)技術(shù)，建立新的TP0136分子分型方法，并與傳統(tǒng)三基因分型法相結(jié)合，建立的TP0136分子分型方法，有助于梅毒螺旋體分子流行病學(xué)研究，揭示梅毒螺旋體屬分子分型與臨床特性之間的關(guān)聯(lián)，還有助于傳統(tǒng)梅毒螺旋體分子分型體系的進一步完善。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
一種基于TP0136基因異質(zhì)性用于區(qū)分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，所述方法利用梅毒螺旋體屬TP0136蛋白異質(zhì)性建立；具體步驟為：梅毒螺旋體屬菌株傳代和提取；梅毒螺旋體屬TP0136序列分析和引物設(shè)計；梅毒螺旋體屬 TP0136DNA擴增、測序和分型。
進一步的，所述的梅毒螺旋體屬包括9株梅毒蒼白密螺旋體和廣東省內(nèi)臨床梅毒患者分離的23株梅毒蒼白密螺旋體臨床分離株；所述9株梅毒蒼白密螺旋體包括NicholsHouston株、Nichols Seattle株、Nichols Dallas株、DAl-1株、Bal73-1 株、Seattle81-4株、Chicago株、MexicoA株、SS14株。
進一步的，步驟(1)中所述的梅毒螺旋體屬菌株傳代是在新西蘭白兔睪丸內(nèi)進行的。
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