[發明專利]一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法

在審

• 申請號: 202010526821.4
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111593132A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: 柯吳堅;魏然;塔依爾·吐爾洪
• 申請（專利權）人: 柯吳堅
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/04
• 代理公司: 上海思牛達專利代理事務所(特殊普通合伙) 31355
• 代理人: 丁劍

1.一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，所述方法利用梅毒螺旋體屬TP0136蛋白異質性建立。

2.根據權利要求1所述的一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，具體步驟為：

(1)梅毒螺旋體屬菌株傳代和提取；

(2)梅毒螺旋體屬TP0136序列分析和引物設計；

(3)梅毒螺旋體屬TP0136 DNA擴增、測序和分型。

3.根據權利要求2所述的一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，所述的梅毒螺旋體屬包括9株梅毒蒼白密螺旋體和廣東省內臨床梅毒患者分離的23株梅毒蒼白密螺旋體臨床分離株；所述9株梅毒蒼白密螺旋體包括Nichols Houston株、Nichols Seattle株、Nichols Dallas株、DAl-1株、Bal73-1株、Seattle81-4株、Chicago株、MexicoA株、SS14株。

4.根據權利要求2所述的一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，步驟(1)中所述的梅毒螺旋體屬菌株傳代是在新西蘭白兔睪丸內進行的。

5.根據權利要求2所述的一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，步驟(1)中所述的梅毒螺旋體屬菌株提取中所用到的1X細胞裂解緩沖液中包含10mM Tris，0.1M EDTA，0.5％SDS；2X細胞裂解緩沖液中包含20mM Tris-HCl,0.2M EDTA,1％SDS。

6.根據權利要求2所述的一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，步驟(3)中所述的梅毒螺旋體屬TP0136DNA擴增時所用到的引物序列如SEQ ID NO:1-3所示。

7.根據權利要求2所述的一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，步驟(3)中所述的梅毒螺旋體屬TP0136DNA擴增時所用到的PCR擴增反應試劑為每50μL PCR擴增反應試劑含5μL待檢測DNA樣本、200μM dNTPs、5μL 10×GoTaq PCR緩沖液、1.5mM MgCl₂、0.6μM TP0136引物、0.5U熱啟動Taq PCR聚合酶。

8.根據權利要求2所述的一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，步驟(3)中所述的梅毒螺旋體屬TP0136DNA擴增時的條件控制為95℃變性10min；95℃1min、60℃2min、72℃1min，共45個循環；最后72℃延伸10min。

9.根據權利要求2所述的一種基于TP0136基因異質性用于區分梅毒螺旋體不同亞型的分子分型方法，其特征在于，步驟(3)中所述的梅毒螺旋體屬TP0136DNA測序是將PCR擴增的產物經1.5％瓊脂糖凝膠電泳鑒定及純化回收，雙向DNA測序法進行測序。