[發(fā)明專利]一種德谷胰島素衍生物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010524886.5
• 申請(qǐng)日: 2020-06-10
• 公開（公告）號(hào): CN113773398B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于歌;陳衛(wèi);駱莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波鯤鵬生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C07K14/62;C12N15/62
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;徐迅

本發(fā)明提供了一種德谷胰島素衍生物及其制備方法。具體地，本發(fā)明提供了包含綠色熒光蛋白折疊單元和德谷胰島素或其活性片段的融合蛋白。本發(fā)明的融合蛋白表達(dá)量顯著提高，融合蛋白中的德谷胰島素蛋白折疊正確，具有生物活性。并且，本發(fā)明融合蛋白中的綠色熒光蛋白折疊單元可以被蛋白酶消化成小片段，和目的蛋白相比分子量差別大，容易分離。本發(fā)明還提供了利用該融合蛋白制備德谷胰島素的方法及制備中間體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，更具體地涉及一種德谷胰島素衍生物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

糖尿病是全球范圍內(nèi)威脅人類健康的一大疾病。在中國(guó)，隨著人民生活方式的改變和老齡化進(jìn)程的加快，糖尿病的患病率呈快速上升趨勢(shì)。糖尿病的急慢性并發(fā)癥，尤其是慢性并發(fā)癥累計(jì)多個(gè)器官，致殘、致死率高，嚴(yán)重影響患者的身心健康，并給個(gè)人、家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。

由丹麥諾和諾德公司研制的重組德谷胰島素注射液“Tresiba”是一種新型的長(zhǎng)效胰島素類似物。2013年1月得到歐盟批準(zhǔn)，應(yīng)用于I型和II型糖尿病患者的治療。德谷胰島素其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)為通過一個(gè)L-γ-Glu連接子將重組人胰島素(去B鏈30位蘇氨酸)的B鏈29位賴氨酸側(cè)鏈εNH₂基與修飾劑16碳脂肪二酸偶聯(lián)而成。此設(shè)計(jì)提供一種獨(dú)特的延長(zhǎng)作用時(shí)間的機(jī)制。該種胰島素類似物具有作用時(shí)間超長(zhǎng)、變異性小、能夠和速效胰島素形成復(fù)方制劑等優(yōu)點(diǎn)，皮下注射后會(huì)形成六聚體結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)可作為一個(gè)存儲(chǔ)庫(kù)緩慢釋放德谷胰島素單體，這些單體能夠緩慢并持續(xù)的被吸收利用。

國(guó)內(nèi)外關(guān)于德谷胰島素制備的報(bào)道很多，一般是通過一種基因重組技術(shù)得到德谷胰島素主鏈(主鏈)，再通過液相合成方法連接tBuO-Pal-Glu(OSu)-OtBu物質(zhì)得到德谷胰島素，由于德谷胰島素主鏈處于未保護(hù)的狀態(tài)，在連接過程中側(cè)鏈容易接在N末端氨基上，從而產(chǎn)生雜質(zhì)，導(dǎo)致純化困難和收率較低的問題，工藝較復(fù)雜。

因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員致力于開發(fā)新的、更長(zhǎng)效的胰島素衍生物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種德谷胰島素衍生物及其應(yīng)用。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種德谷胰島素前體融合蛋白，從N端到C端具有式III所示的結(jié)構(gòu)：

A-FP-TEV-R-G???(III)

式中，

“-”代表肽鍵；

A為無或前導(dǎo)肽，

FP為綠色熒光蛋白折疊單元，

TEV為第一酶切位點(diǎn)，較佳地為TEV酶酶切位點(diǎn)；

R為用于酶切的精氨酸或賴氨酸；

G為德谷胰島素或其活性片段；

其中，所述的綠色熒光蛋白折疊單元包含2-6個(gè)選自下組的β-折疊單元：