[發明專利]一種德谷胰島素衍生物及其應用

有效

• 申請號: 202010524886.5
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN113773398B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 于歌;陳衛;駱莉
• 申請（專利權）人: 寧波鯤鵬生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/62;C12N15/62
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;徐迅

1.一種德谷胰島素前體融合蛋白，其特征在于，從N端到C端具有式III所示的結構：

A-FP-TEV-R-G???(III)

式中，

“-”代表肽鍵；

A為無或前導肽，

FP為綠色熒光蛋白折疊單元，

TEV為第一酶切位點；

R為用于酶切的精氨酸或賴氨酸；

G為德谷胰島素主鏈或其活性片段；

其中，所述的綠色熒光蛋白折疊單元為2-3個選自下組的β-折疊單元：

并且所述的綠色熒光蛋白折疊單元選自：u2-u3、u4-u5、u1-u2-u3、u3-u4-u5或u4-u5-u6。

2.?如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的G為Boc修飾的德谷胰島素前體，具有式IV所示的結構：

?GB-X-GA???(IV)

式中，

“-”代表肽鍵；

GB為第29位Boc修飾的德谷胰島素B鏈，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:?2所示，

X為連接肽；

GA為德谷胰島素A鏈，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:?3所示。

3.?如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的德谷胰島素前體融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:?1所示。

4.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述TEV為TEV酶酶切位點。

5.?一種德谷胰島素主鏈融合蛋白，其特征在于，從N端到C端具有式I所示的結構：

A-FP-TEV-R-D?????(I)

式中，

“-”代表肽鍵；

A為無或前導肽，

FP為綠色熒光蛋白折疊單元；

TEV為第一酶切位點；

R為用于酶切的精氨酸或賴氨酸；

D為Boc修飾的德谷胰島素主鏈，具有式II所示的結構：

式中，

“║”代表二硫鍵；

GA為德谷胰島素A鏈，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:?3所示，

X為無或為連接肽；

GB為第29位Boc修飾的德谷胰島素B鏈，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:?2所示；

其中，所述的綠色熒光蛋白折疊單元為2-3個選自下組的β-折疊單元：

并且所述的綠色熒光蛋白折疊單元選自：u2-u3、u4-u5、u1-u2-u3、u3-u4-u5或u4-u5-u6。

6.如權利要求5所述的德谷胰島素主鏈融合蛋白，其特征在于，所述的綠色熒光蛋白折疊單元為u3-u4-u5。

7.如權利要求5所述的德谷胰島素主鏈融合蛋白，其特征在于，所述TEV為TEV酶酶切位點。

8.一種制備Boc修飾的德谷胰島素前體的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：

(i)?利用重組菌進行發酵，制備權利要求1所述的融合蛋白；

(ii)?對所述融合蛋白進行酶切，從而獲得Boc修飾的德谷胰島素前體，所述Boc修飾的德谷胰島素前體具有式IV所示的結構：

?GB-X-GA???(IV)

式中，

“-”代表肽鍵；

GB為第29位Boc修飾的德谷胰島素B鏈，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:?2所示，

X為連接肽；

GA為德谷胰島素A鏈，氨基酸序列如SEQ?ID?NO:?3所示。

9.?如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述連接肽的氨基酸序列為R、RR、RRR，或如SEQ?ID?NO:?4-7所示。