[發明專利]作為急性腦梗死診斷標志物的血清外泌體miR-410-3p的應用及其檢測方法

在審

• 申請號: 202010523816.8
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN111534584A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 季煜華;周心;季秋虹;季菊玲
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/113
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 徐思波

本發明提供一種作為急性腦梗死診斷標志物的血清外泌體miR?410?3p的應用及其檢測方法，所述血清外泌體miR?410?3p的序列為：AATATAACACAGATGGCCTGT，用于急性腦梗死診斷和治療的生物標志物。所述血清外泌體miR?410?3p的檢測方法包括如下步驟：收集血清；分離血清中的外泌體，通過Illumina對血清中的外泌體進行small RNA測序，從中獲得miRNAs表達譜，進行生物信息學分析篩選樣品間差異表達miRNAs；實時熒光定量聚合酶鏈式反應技術分析腦組織特異性的miR?410?3p在腦卒中患者和健康人群血清外泌體中的表達。根據本發明的研究，腦卒中患者血清外泌體中miR?410?3p的水平較對照組顯著增加（P＜0.001），因此，急性腦梗死后，腦組織特異性miR?410?3p以外泌體形式進入外周血，其水平較對照組顯著增加，因此它們可作為急性腦缺血損傷診斷標志物。

技術領域

本發明屬于生物技術和醫學領域，具體涉及一種作為急性腦梗死診斷標志物的血清外泌體miR-410-3p的應用及其檢測方法。

背景技術

腦卒中是神經系統較為常見的疾病，具有較高的發病率、致殘率和病死率，嚴重危害人體健康和生活質量。目前，美國FDA批準用于急性缺血性腦卒中治療的唯一藥物是靜脈給予組織纖溶酶原激活劑，其通過在卒中發生后的4.5小時內溶解血塊。但由于治療時間窗短，只有少數患者能接受這種治療，大大限制了其在臨床上的應用。因此，急性缺血性腦卒中的早期準確診斷至關重要。另外，長期以來，缺血性腦卒中的早期診斷主要依賴于臨床查體和各種神經成像技術，雖然腦電子計算機X射線斷層掃描技術（CT）可能有效排除出血性腦卒中，但對于缺血性腦卒中的診斷特異性并不強，而磁共振成像（MRI）雖然在急性缺血性腦卒中診斷中具有重要的參考價值，但由于中國的普及率低及費用高等現實問題，亦難以被廣泛使用。因此，開發快速診斷生物標志物具有顯著的臨床應用潛力。

MiRNAs是一類由內源基因編碼的長度約為18-22個核苷酸的非編碼 RNAs分子，miRNAs 通過靶向3'mRNA 轉錄本的非翻譯區在轉錄后水平調控基因表達，在多種生理和病理過程中發揮重要的作用。已有諸多的研究表明，多種體液中可以檢測到miRNAs，如血漿、血清、尿液和腦脊液，而且普遍認為損傷的細胞或循環細胞釋放的miRNAs引起血清miRNAs表達的增加。基于miRNAs在體液中的穩定性，miRNAs的組織特異性，以及通過實時PCR和微陣列等方法可以比較方便地定量檢測miRNAs，人們對利用循環miRNAs 作為臨床生物標志物產生了極大的興趣。對于缺血性腦卒中，血腦屏障的破壞和腦組織的損傷，使miRNAs釋放到循環血液中。在一定程度上，循環miRNAs 的水平，特別是腦特異或腦高表達miRNAs的水平可能反映了腦梗死的嚴重程度。因此，已經有許多研究用微陣列或RT-PCR的方法篩選來自腦卒中患者循環miRNAs用于腦卒中的診斷和預后，如缺血性腦卒中患者血液中let-7e-5p、miR-107，miR-128b和miR-153的表達水平顯著高于對照組，因此認為它們可以作為腦梗死早期診斷的血液標志物。盡管已有很多關于循環miRNAs作為缺血性腦卒中診斷和預后的研究，但是目前發現的這些miRNAs大部分都缺乏腦組織特異性，至今尚無可靠的循環miRNAs可作為急性缺血性腦卒中的診斷標志物。

miR-410具有中樞神經系統特異性，原位雜交結果表明miR-410在腦和脊髓中特異性表達（Identification of new central nervous system specific mousemicroRNAs），富集于神經元（Comprehensive Expression Analyses of Neural Cell-Type-Specific miRNAs；Identify New Determinants of the Specification andMaintenance of Neuronal Phenotypes）。

近年來，研究顯示循環外泌體具有作為中樞神經系統疾病診斷工具的巨大潛力，不但腦細胞可以合成和釋放外泌體，更重要的是外泌體在機體特定的狀態下具有穿透血腦屏障的能力，從中樞釋放到外周的循環外泌體可以反映中樞神經系統狀態的信息。