[發明專利]一種奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法

在審

• 申請號: 202010523433.0
• 申請日: 2020-06-10
• 公開（公告）號: CN111458467A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 邱靜;宋曉;賈琪;李耘;錢永忠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/04
• 分類號: G01N33/04
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

1.一種奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

將奶粉提取物與水混合后形成培養液，將斑馬魚胚胎置于所述培養液中培養，通過所述斑馬魚胚胎的心率或畸形率判斷奶粉中黃曲霉毒素M1的超標情況；

其中，畸形是依據斑馬魚胚胎的肝臟和卵黃囊情況進行判斷。

2.根據權利要求1所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，所述奶粉提取物為奶粉提取液的形式，所述奶粉提取液與水的體積比為0.8-1.2:1000，在所述培養液中培養90-100h后進行心率或畸形率的測定；

優選地，畸形是指肝臟發生變性或卵黃囊吸收延遲。

3.根據權利要求2所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，所述奶粉提取液與水的體積比為0.9-1.1:1000；

優選地，在所述培養液中培養過程中控制溫度為27-28℃；

優選地，在所述培養液中培養時間為95-98h，在培養過程中進行避光處理。

4.根據權利要求3所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，所述奶粉提取液的制備過程包括：將奶粉與水混合溶解后與提取劑溶液混合提取，再經過鹽析后分離上清液；將得到的所述上清液進行蒸干并復溶；

優選地，所述提取劑選自0.5-1.5％乙酸乙腈、0.5-1.5％甲酸乙腈、甲醇和乙腈中的至少一種；更優選為0.5-1.5％乙酸乙腈。

5.根據權利要求4所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，所述提取劑溶液的質量分數為0.5-1.5％，每克奶粉對應所述提取劑溶液的用量為5-10mL，每克奶粉對應水的用量為3-8mL；

優選地，鹽析過程所用試劑為氯化物；更優選地，所述氯化物為氯化鈉，每克奶粉對應氯化鈉的用量為1.5-2.5g。

6.根據權利要求4所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，將所述復溶過程所用的溶劑選自二甲基亞砜和丙酮中的至少一種；更優選為二甲基亞砜；

優選地，所述上清液與所述復溶過程所用的溶劑的體積比為70-80:1；

優選地，分離上清液的過程是渦旋0.5-1.5min后，在4000-5000rpm/min的轉速下離心3-8min，然后再進行過濾分離。

7.根據權利要求2-6中任一項所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，在所述培養液中培養完成后，心率小于或等于126次/min，則奶粉中黃曲霉毒素M1的含量超過0.5μg/Kg；

優選地，心率小于或等于121次/min，則奶粉中黃曲霉毒素M1的含量超過5μg/Kg；

優選地，心率小于或等于110次/min，則奶粉中黃曲霉毒素M1的含量超過50μg/Kg。

8.根據權利要求2-6中任一項所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，在所述培養液中培養完成后，畸形率大于或等于30％，則奶粉中黃曲霉毒素M1的含量超過0.5μg/Kg。

9.根據權利要求2所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，分別在培養時間達到20-30h、40-55h和65-75h時，測定斑馬魚胚胎的心率，并觀察斑馬魚胚胎的畸形情況；

優選地，在觀察斑馬魚胚胎時，采用顯微鏡進行觀察，并調節放大倍數為3-4倍；更優選地，在觀察時采用甲基纖維凝膠以側面體位固定斑馬魚胚胎。

10.根據權利要求1所述的奶粉中黃曲霉毒素M1的檢測方法，其特征在于，所述斑馬魚胚胎選自發育正常的3-4hpf的胚胎；

優選地，所述斑馬魚胚胎是由成年AB系斑馬魚按雌雄比1:1的比例進行交配，采集受精卵并挑選出發育正常的3-4hpf的斑馬魚胚胎。