[發(fā)明專利]FL2-siRNA在制備治療角膜堿燒傷藥物中的應(yīng)用及角膜堿燒傷藥物

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010521213.4
• 申請(qǐng)日: 2020-06-10
• 公開（公告）號(hào): CN111588730A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周世有;彭文艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)中山眼科中心
• 主分類號(hào): A61K31/7105
• 分類號(hào): A61K31/7105;A61P27/02
• 代理公司: 廣州匯盈知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44603
• 代理人: 張蓓蓓

本發(fā)明公開了FL2?siRNA在制備治療角膜堿燒傷藥物中的應(yīng)用，所述FL2?siRNA用于角膜堿燒傷后的角膜損傷疾病的急性期或早期治療，加速角膜損傷愈合，減少損傷后并發(fā)癥的出現(xiàn)；FL2?siRNA制備成注射液用于角膜堿燒傷的結(jié)膜下注射，用于促進(jìn)局部上皮細(xì)胞的遷移與損傷愈合。本發(fā)明治療角膜堿燒傷藥物，其特征在于：所述治療角膜堿燒傷藥物是一種含有FL2?siRNA的注射液，包括膽固醇、甲基化修飾的siRNA、RNase free水。本發(fā)明為角膜堿性燒傷提供精準(zhǔn)的治療靶點(diǎn)，為眼堿化學(xué)燒傷的藥物治療提供理論依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及治療角膜堿性燒傷藥物的技術(shù)領(lǐng)域，具體說是FL2-siRNA在制備治療角膜堿燒傷藥物中的應(yīng)用及角膜堿燒傷藥物。

背景技術(shù)

視力為人類提供了關(guān)于外部世界超過85％的全部信息。眼化學(xué)傷，尤其是角膜堿性燒傷，是我國常見難治性致盲眼病,是治療最棘手的常見病因之一。在治療和預(yù)后方面，它比酸燒傷或機(jī)械性角膜損傷更具有破壞性。它可引起廣泛的角膜新生血管化、角膜潰瘍和角膜疤痕，從而導(dǎo)致角膜穿孔和視力喪失甚至失明，可對(duì)生活質(zhì)量造成持續(xù)性的毀滅性影響。除了角膜移植之外，目前還沒有有效的治療方法，但這類患者因?yàn)閲?yán)重的角膜新生血管和角膜移植的術(shù)后排斥依然非常具有挑戰(zhàn)性的。所以研究眼堿性化學(xué)傷愈合的相關(guān)分子參與機(jī)制，尋找更有效、更經(jīng)濟(jì)、更精準(zhǔn)的治療靶點(diǎn)，為眼堿化學(xué)燒傷的藥物治療提供理論依據(jù)稱為研究的重點(diǎn)，也將是一個(gè)巨大的治療性突破。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種FL2-siRNA在制備治療角膜堿燒傷藥物中的應(yīng)用及角膜堿燒傷藥物，為角膜堿性燒傷提供精準(zhǔn)的治療靶點(diǎn)，為眼堿化學(xué)燒傷的藥物治療提供理論依據(jù)。

本發(fā)明通過以下技術(shù)路線來實(shí)現(xiàn)：

FL2-siRNA在制備治療角膜堿燒傷藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述FL2-siRNA用于角膜堿燒傷后的角膜損傷疾病的急性期或早期治療，加速角膜損傷愈合，減少損傷后并發(fā)癥的出現(xiàn)。

FL2-siRNA制備成注射液用于角膜堿燒傷的結(jié)膜下注射，用于促進(jìn)局部上皮細(xì)胞的遷移與損傷愈合。

一種治療角膜堿燒傷藥物，其特征在于：所述治療角膜堿燒傷藥物是一種含有FL2-siRNA的注射液，包括膽固醇、甲基化修飾的siRNA、RNase free水。

所述含有FL2-siRNA的注射液中FL2基因的siRNA的堿基序列是：5'GGTCTTGGATTCTCCCTACGA 3'。

所述堿基序列5'GGTCTTGGATTCTCCCTACGA 3'通過下列生產(chǎn)流程得到：

第一步是將預(yù)先連接在固相載體CPG上的活性基團(tuán)被保護(hù)的FL-2核苷酸與三氯乙酸反應(yīng)，脫去其5'-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT，獲得游離的5'-羥基；第二步，合成DNA的原料，亞磷酰胺保護(hù)FL-2核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到FL-2核苷亞磷酸活化中間體，它的3'端被活化，5'-羥基仍然被DMT保護(hù)，與溶液中游離的5'-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)；第三步，帶帽反應(yīng)，即縮合反應(yīng)中可能有極少數(shù)5'-羥基沒有參加反應(yīng)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應(yīng)，這種短片段通過在純化時(shí)分離掉；第四步，在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式的FL-2核苷酸轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯；重復(fù)以上步驟，直到所有要求合成的堿基被接上去形成FL-2siRNA。

本發(fā)明相比于現(xiàn)有技術(shù)，明顯具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明通過比較評(píng)估角膜堿性燒傷后FL2-siRNA與對(duì)照組control siRNA的再上皮化率，經(jīng)過FL2-siRNA處理后角膜上皮愈合方面顯著改善。FL2-siRNA可使得FL-2靶向缺失，從而增強(qiáng)了角膜再上皮化。

(1)可以用于角膜堿燒傷后(甚至所有角膜損傷疾病的急性期或早期治療)，F(xiàn)L2-siRNA促進(jìn)角膜上皮細(xì)胞的遷移，有助于損傷修復(fù)；