[發明專利]檢測新冠病毒的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010520226.X
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111500789A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 許明炎;張曉妮;李慧
• 申請（專利權）人: 深圳海普洛斯醫學檢驗實驗室
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6848
• 代理公司: 深圳舍穆專利代理事務所(特殊普通合伙) 44398
• 代理人: 黃賢炬

1.一種檢測新冠病毒的試劑盒，其特征在于，

包括：引物探針集，其包括針對新冠病毒的靶標基因設計的引物和針對新冠病毒的靶標基因設計的探針；緩沖液，其包括Tris-HCl、氯化鎂、氯化鉀、甘油、硫酸銨、甜菜堿、吐溫20和dNTP，所述dNTP為包括dATP、dCTP、dGTP和dUTP的混合物；酶混液，其包括擴增酶、逆轉錄酶和尿嘧啶-N-糖基化酶，其中，所述Tris-HCl的濃度為20至30mM，所述氯化鎂的濃度為2至3mM，所述氯化鉀的濃度為35至45mM，所述甘油的濃度為3％至7％，所述硫酸銨的濃度為25至35mM，所述甜菜堿的濃度為0.4至0.8M，所述吐溫20的濃度為0.02％至0.05％，所述dATP、所述dCTP和所述dGTP的濃度分別為0.2至0.6mM，所述dUTP的濃度為0.5至1mM。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述擴增酶的濃度為0.5至2U，所述逆轉錄酶的濃度為150至250U，所述尿嘧啶-N-糖基化酶的濃度為0.2至1.2U，并且所述擴增酶為熱啟動Taq酶，所述逆轉錄酶為核糖核酸酶H活性缺失的MMLV逆轉錄酶。

3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述引物探針集包括針對新冠病毒的開放讀碼框1ab設計的第一引物對和第一探針，所述第一引物對包括核苷酸序列為SEQ ID NO:1的第一上游引物和核苷酸序列為SEQ IDNO:2的第一下游引物，所述第一探針的核苷酸序列為SEQ ID NO:3，所述第一探針標記有熒光基團。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：

所述引物探針集還包括針對新冠病毒的核殼蛋白基因設計的第二引物對和第二探針，所述第二引物對包括核苷酸序列為SEQ ID NO:4的第二上游引物和核苷酸序列為SEQ IDNO:5的第二下游引物，所述第二探針的核苷酸序列為SEQ ID NO:6，所述第二探針標記有不同于所述第一探針的熒光基團。

5.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述引物探針集包括針對內標基因設計的第三引物對和第三探針，所述第三引物對包括核苷酸序列為SEQ ID NO:7的第三上游引物和核苷酸序列為SEQ ID NO:8的第三下游引物，所述第三探針的核苷酸序列為SEQ ID NO:9，所述第三探針標記有熒光基團。

6.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：

所述第一上游引物的濃度為0.25至0.35mM，所述第一下游引物的濃度為0.25至0.35mM，所述第一探針的濃度為0.05至0.15mM。

7.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：

所述第二上游引物的濃度為0.25至0.35mM，所述第二下游引物的濃度為0.25至0.35mM，所述第二探針的濃度為0.2至0.3mM。

8.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：

所述第三上游引物的濃度為0.25至0.35mM，所述第三下游引物的濃度為0.25至0.35mM，所述第三探針的濃度為0.2至0.3mM。

9.如權利要求1或5所述的試劑盒，其特征在于：

還包括含有靶標基因假病毒的陽性質控品和含有內標基因假病毒的陰性質控品。

10.一種檢測新冠病毒的方法，其特征在于：

準備待測樣本并使用權利要求1至9任一項所述的試劑盒進行擴增。