[發明專利]檢測新冠病毒的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010520226.X
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111500789A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 許明炎;張曉妮;李慧
• 申請（專利權）人: 深圳海普洛斯醫學檢驗實驗室
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6848
• 代理公司: 深圳舍穆專利代理事務所(特殊普通合伙) 44398
• 代理人: 黃賢炬

本公開提供了一種檢測新冠病毒的試劑盒，其包括：引物探針集，其包括針對新冠病毒的靶標基因設計的引物和針對新冠病毒的靶標基因設計的探針；緩沖液，其包括Tris?HCl、氯化鎂、氯化鉀、甘油、硫酸銨、甜菜堿、吐溫20和dNTP，dNTP為包括dATP、dCTP、dGTP和dUTP的混合物；酶混液，其包括擴增酶、逆轉錄酶和尿嘧啶?N?糖基化酶，其中，Tris?HCl的濃度為20至30mM，氯化鎂的濃度為2至3mM，氯化鉀的濃度為35至45mM，甘油的濃度為3％至7％，硫酸銨的濃度為25至35mM，甜菜堿的濃度為0.4至0.8M，吐溫20的濃度為0.02％至0.05％，dATP、dCTP和dGTP的濃度分別為0.2至0.6mM，dUTP的濃度為0.5至1mM。根據本公開能夠提供一種提高檢測靈敏度的檢測新冠病毒的試劑盒及方法。

技術領域

本公開特別涉及一種檢測新冠病毒的試劑盒及方法。

背景技術

2019新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)，也稱“新冠病毒”屬于有包膜的β屬冠狀病毒，其遺傳物質為單條正義RNA鏈，該RNA由表面布滿刺突蛋白(S Protein)的蛋白質外殼包裹，這些刺突蛋白使新冠病毒具有高度傳染性。

新冠病毒具有人傳人的能力，其傳播途徑包括呼吸道飛沫傳播及接觸傳播、可透過直接接觸帶有病毒的分泌物傳染，而且當前對于新冠病毒所致疾病沒有特異治療方法，因此，有必要針對新冠病毒開發檢測體系來滿足臨床需要。

目前，新冠病毒快速檢測的方法主要為利用試劑盒將病毒RNA逆轉錄形成cDNA后再進行熒光定量PCR，然而現有檢測中存在較多假陰性的情況，其原因可能是試劑盒檢測靈敏度低使得檢測下限較高從而導致檢測結果具有較高的假陰性率。

發明內容

本公開有鑒于上述現有技術的狀況而完成，其目的在于提供一種提高檢測靈敏度的檢測新冠病毒的試劑盒及方法。

為此，本公開一方面提供了一種新冠病毒檢測的試劑盒及方法，其包括：引物探針集，其包括針對新冠病毒的靶標基因設計的引物和針對新冠病毒的靶標基因設計的探針；緩沖液，其包括Tris-HCl、氯化鎂、氯化鉀、甘油、硫酸銨、甜菜堿、吐溫20和dNTP，所述dNTP為包括dATP、dCTP、dGTP和dUTP的混合物；酶混液，其包括擴增酶、逆轉錄酶和尿嘧啶-N-糖基化酶，其中，所述Tris-HCl的濃度為20至30mM，所述氯化鎂的濃度為2至3mM，所述氯化鉀的濃度為35至45mM，所述甘油的濃度為3％至7％，所述硫酸銨的濃度為25至35mM，所述甜菜堿的濃度為0.4至0.8M，所述吐溫20的濃度為0.02％至0.05％，所述dATP、所述dCTP和所述dGTP的濃度分別為0.2至0.6mM，所述dUTP的濃度為0.5至1mM。在本公開中，試劑盒利用針對新冠病毒的靶標基因設計的引物和探針進行檢測，并通過改良緩沖液的成分比例來提高檢測的靈敏度，而且能夠利用尿嘧啶-N-糖基化酶與dUTP形成防污染體系，進而能夠有利于靈敏度的提升。

另外，在本公開一方面所涉及的試劑盒中，可選地，在所述酶混液中，所述擴增酶的濃度為0.5至2U，所述逆轉錄酶的濃度為150至250U，所述尿嘧啶-N-糖基化酶的濃度為0.2至1.2U，并且所述擴增酶為熱啟動Taq酶，所述逆轉錄酶為核糖核酸酶H活性缺失的MMLV逆轉錄酶。由此，能夠提高擴增效率，并且能夠有效減少污染。

另外，在本公開一方面所涉及的試劑盒中，可選地，所述引物探針集包括針對新冠病毒的開放讀碼框1ab設計的第一引物對和第一探針，所述第一引物對包括核苷酸序列為SEQ ID NO:1的第一上游引物和核苷酸序列為SEQ ID NO:2的第一下游引物，所述第一探針的核苷酸序列為SEQ ID NO:3，所述第一探針標記有熒光基團。在這種情況下，試劑盒具有針對新冠病毒基因組中高度保守且特異的開放讀碼框1ab區域設計引物和探針，由此能夠特異性檢測新冠病毒。