[發明專利]一種基于PdCuPt的電化學免疫傳感器的制備

在審

• 申請號: 202010519234.2
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111751432A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 劉青;趙歡;劉會;董慧;譚召靈;董云會
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N27/416
• 分類號: G01N27/416;G01N27/327;G01N27/30;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/576
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于PdCuPt的電化學免疫傳感器的制備，其特征在于，包括以下步驟：

（1）PdCuPt@Fe-N-rGO的制備：將單獨制備的超小型PdCuPt雙十二面體納米立方和Fe-N-rGO納米片結合；

（2）構建無標記型PdCuPt@Fe-N-rGO的電化學免疫傳感器，測定乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag含量，繪制工作曲線。

2.根據權利要求1所述的一種檢測乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag的電化學免疫傳感器及其制備方法，其特征在于：步驟（1）所述的PdCuPt@Fe-N-rGO的制備具體如下：

（1）PdCuPt雙十二面體納米立方的制備

在室溫下，將10.0 ~ 30.0 mg的Pd(acac)₂，5.0 ~ 15.0 mg的Pt(acac)₂，10.0 ~ 20.0mg的Cu(acac)₂，100.0 ~ 110.0 mg的十烷基三甲基溴化銨，100.0 ~ 110.0 mg的檸檬酸鈉加到裝有6.0 ~ 10.0 mL混合溶劑（油胺（3.0 ~ 5.0 mL）和N，N-二甲基甲酰胺（3.0 ~ 5.0mL））的50 mL的圓底燒瓶中，將混合物攪拌30 min，然后將圓底燒瓶在180 ℃油浴加熱24h，通過用甲苯和乙醇（1:3）混合溶液洗滌和離心（8000 rpm，15 min）循環五次來收集合成產物，收集的產物儲存在乙醇溶液中；

（2）GO納米片的制備

將5 ~ 15 g石墨和3.5 ~ 10.5 g硝酸鈉置于燒瓶中，在冰浴攪拌下加入350 ~ 1050mL硫酸，劇烈攪拌下加入10 ~ 30 g高錳酸鉀，并將燒瓶在室溫下保持6天，然后向混合物中加入硫酸（200 ~ 600 mL，5 wt%），并在98 ℃下保持2 h，當溫度降至50 ℃時，加入雙氧水（10 ~ 30 mL，30 wt%）終止反應，離心洗滌，收集沉淀并冷凍干燥2天；

（3）Fe-N-rGO納米片的制備

以制備的GO納米片為原料合成了Fe-N-rGO，GO在去離子水(2 mg/mL)中溶解，用超聲處理3 h，將0.5 ~ 1.5 mL FeCl₃·6H₂O（3 mg/mL）水溶液加入到50 ml GO懸浮液中，再超聲處理3 min，液氮冷凍，-60 ℃冷凍干燥72 h，干燥后的樣品在NH₃氛圍下750 ℃熱處理1 h，得到Fe-N-rGO；

（4）PdCuPt@Fe-N-rGO的制備

向10.0 mg制備的Fe-N-rGO加入5.0 ~ 15.0 mL PdCuPt雙十二面體納米立方分散液（1.0 mg/mL），然后將混合物超聲1 h，離心后，黑色沉淀物在室溫下干燥，然后，將20.0 mg黑色粉末再分散在5.0 mL緩沖溶液（pH=7.4）中。

3.根據權利要求1所述的一種檢測乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag的電化學免疫傳感器及其制備方法，其特征在于：步驟（2）所述的構建電化學免疫傳感器，具體如下：

（1）將直徑為3.0 ~ 5.0 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉拋光成鏡面，在無水乙醇中超聲清洗干凈；

（2）將6.0 μL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的PdCuPt@Fe-N-rGO分散液滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干；

（3）將6.0 μL、5 ~ 15 μg/mL的乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag抗體滴加到電極表面，pH=7.0磷酸鹽緩沖液沖洗電極表面，4.0 ℃冰箱中干燥；

（4）繼續將3.0 μL、1 ~ 2 mg/mL的牛血清蛋白溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點，pH=7.0磷酸鹽緩沖液沖洗電極表面，4.0 ℃冰箱中晾干；

（5）繼續滴加6.0 μL、10 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同濃度的乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag溶液，用pH=7.0磷酸鹽緩沖液沖洗，4.0 ℃冰箱中干燥，制得一種基于PdCuPt的電化學免疫傳感器。

4.根據權利要求1所述的一種檢測乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag的電化學免疫傳感器及其制備方法，其特征在于：步驟（2）所述的測定乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag，繪制工作曲線，具體如下：

（1）采用10 mL、50 mmol/L的pH＝7.0的磷酸鹽緩沖溶液配制不同濃度的乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag溶液，將6 μL不同濃度的乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag溶液分別滴涂至電極表面，反應0.5 ~ 2 h，晾干后連接至電化學工作站中，分別將電極浸于pH＝7.0的磷酸鹽緩沖溶液中測定其氧化還原電流變化，當背景電流趨于穩定后，每隔50 s向10 mL、50mmol/L的pH=7.0磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的過氧化氫溶液，記錄電流變化；

（2）根據所得電流差值與乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag濃度呈線性關系，繪制工作曲線；

（3）利用工作曲線法，得到待測樣品中乙型肝炎病毒表面抗原HBs-Ag的濃度。