[發明專利]大熊貓輪狀病毒CH-1株VP7陽性質粒及其構建方法和應用在審
| 申請號： | 202010519089.8 | 申請日： | 2020-06-09 |
| 公開（公告）號： | CN111635910A | 公開（公告）日： | 2020-09-08 |
| 發明（設計）人： | 蘇小艷;侯蓉;劉頌蕊;張東升;燕霞;李林;李運莉;岳嬋娟 | 申請（專利權）人： | 成都大熊貓繁育研究基地 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/46;C12N1/21;C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京酷愛智慧知識產權代理有限公司 11514 | 代理人： | 袁克來 |
| 地址： | 610057 四川*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大熊貓 輪狀病毒 ch vp7 陽性 質粒 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種大熊貓輪狀病毒CH-1株VP7陽性質粒，其特征在于，所述VP7陽性質粒由所述VP7基因和PUC57載體構建而成。
2.根據權利要求1所述的VP7陽性質粒，其特征在于：所述VP7基因序列兩端設計有BamHI/SalI酶切位點。
3.如權利要求2所述的VP7陽性質粒的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
采用BamHI/SalI酶分別處理VP7基因和PUC57載體；
將處理產物進行核酸電泳分析并回收1048bp和2697bp的基因序列；
將1048bp和2697bp的基因序列進行連接，既得所述VP7陽性質粒。
4.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于，所述采用BamHI/SalI酶分別處理VP7基因和PUC57載體包括：
將分別含有VP7基因和PUC57載體的反應體系在37℃下孵育3.5～5h；
其中，反應體系包括：2ul BamHI/SalI酶、10ul 10×buffer、10ul VP7基因/PUC57載體和33ul ddH2O。
5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述將1048bp和2697bp的基因序列進行連接包括：
將含有1048bp和2697bp基因序列的反應體系在4℃條件下孵育過夜，隨后在16℃下孵育3.5～4.5h；
其中，反應體系包括：1ul T4 DNA Liguse、1ul 10×buffer、6ul VP7基因和2ul PUC57載體。
6.含有權利要求1～2任一所述的VP7陽性質粒或權利要求3～5任一所述的構建方法構建得到的VP7陽性質粒的大腸桿菌菌株。
7.根據權利要求6所述的大腸桿菌菌株，其特征在于，由權利要求1～2任一所述的VP7陽性質粒或權利要求3～5任一所述的構建方法構建得到的VP7陽性質粒轉化到大腸桿菌TOP10感受態細胞中得到。
8.權利要求1～2任一所述的VP7陽性質粒或權利要求3～5任一所述的構建方法構建得到的VP7陽性質粒作為陽性對照在大熊貓輪狀病毒PCR檢測中的應用。
9.一種用于檢測大熊貓輪狀病毒的PCR檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1～2任一所述的VP7陽性質粒或權利要求3～5任一所述的構建方法構建得到的VP7陽性質粒。
10.一種用于檢測大熊貓輪狀病毒的PCR檢測試劑盒，其特征在于，包括標準品，所述標準品為從權利要求6或7所述的大腸桿菌菌株中提取的VP7陽性質粒。
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