[發(fā)明專利]一種高粱中單寧濃度的檢測方法

在審

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• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111830147A
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 倪德讓;葉興乾;胡光源;王莉;陳士國
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州茅臺酒股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務(wù)所 11111
• 代理人: 謝敏楠

本申請公開了一種高粱中單寧濃度的檢測方法，包括：提取高粱樣品中的單寧組分作為單寧樣品；對單寧樣品及單寧標準溶液進行液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用分析，其中液相色譜為親水作用液相色譜，液相色譜的檢測器為熒光檢測器，質(zhì)譜為飛行時間質(zhì)譜；以及根據(jù)對單寧標準溶液進行液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用分析所得的結(jié)果得到標準曲線，計算單寧樣品的單寧濃度。本申請的檢測方法能有效分離釀酒用高粱單寧不同聚合度的聚合體，選擇性和特異性好，鑒定了釀酒用高粱單寧各聚合度的組成。其方法精度高，分離樣品高粱單寧至11聚體，標準曲線R²可達0.9978，線性良好，相較比色法定量準確度高；流動相能夠使用常用的反相體系，便于開展釀酒用高粱中單寧的全面有效分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及化學(xué)檢測領(lǐng)域，更具體涉及一種高粱中單寧濃度的檢測方法。

背景技術(shù)

單寧是很多植物中都存在的次生代謝產(chǎn)物，通常用作抵御病原體和捕食者的酚類物質(zhì)存在。單寧根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)特征可被分為水解單寧及縮合單寧。水解單寧(或稱可水解單寧)是棓酸，或與棓酸有生源關(guān)系的酚羧酸與多元醇組成的酯。而縮合單寧(原花色素)是羥基黃烷類單體組成的縮合物，單體間通常以C-C鍵連接，在水溶液中不易分解，在熱的醇-酸溶液中能酸解生成花色素。研究表明高粱中的單寧幾乎均為縮合單寧，也即原花色素。單寧的存在不僅能夠影響高粱的口感與消化特性，也同時影響了高粱的生物利用度。

研究表明單寧在白酒的釀造過程中，對發(fā)酵以及白酒的風(fēng)格、品味與特性的形成具有重要的影響。單寧與產(chǎn)酒率呈負相關(guān)，過多的單寧會阻礙酒精發(fā)酵，但同時，單寧的存在會增加白酒的風(fēng)味，白酒中的芳香族化合物可經(jīng)微生物發(fā)酵從原料中的單寧轉(zhuǎn)化而來，適量的單寧還可抑制發(fā)酵中的有害微生物。

目前利用高效液相色譜技術(shù)對原花色素進行分離并分析是解析原花色素組成的最常用手段，主要方法包括：

一、反相高效液相色譜(RP-HPLC)

在反相高效液相色譜技術(shù)中，流動相比固定相更具極性，因此化合物以極性逐漸降低的順序洗脫下來。RP-HPLC技術(shù)能用于分離低聚原花色素，但是很難分離聚合度高的原花色素，因為伴隨聚合度的增加，原花色素的結(jié)構(gòu)和立體異構(gòu)體的可能組合也會變得更多，導(dǎo)致原花色素在色譜圖上以單一的寬峰形式呈現(xiàn)。因此反相高效液相色譜常與酸降解相結(jié)合，用來識別原花色素的組成結(jié)構(gòu)單元，即原花色素的末端單元與延伸單元。原花色素的延伸單元在親核試劑的攻擊下，C-4位與親核試劑結(jié)合形成加成產(chǎn)物，而其末端單元形成相應(yīng)的黃烷醇單體。間苯三酚和芐硫醇法是最常用于酸降解的親核試劑，芐硫醇法能夠用于識別A、B型連接鍵，但因其臭味而使用有限。

二、正相高效液相色譜(NP-HPLC)

正相-高效液相色譜技術(shù)使用二氧化硅作為極性固定相，而有機溶劑作為低極性流動相，其洗脫順序與RP-HPLC相反，通常以聚合度的增加順序洗脫原花色素。在1993年，NP-HPLC首次被用于從可可豆和葡萄籽中分離原花青素至四聚體。后來，此法經(jīng)改進后能夠進一步分離原花色素至十聚體，并成功地應(yīng)用于水果、蔬菜、谷物、堅果、飲料和香料等39種不同食物中原花色素的測定。

三、親水作用液相色譜(HILIC)

HILIC方法最早在1990年提出用于多肽和核酸的分析。它屬于NP-HPLC的一種變形，分析物通過在親水固定相上的水層和疏水洗脫液之間分配而保留，因此其洗脫順序與NP-HPLC的一致，但是其流動相使用的是與RP-HPLC相似的半水溶性流動相，因此克服了原花色素這類強極性物質(zhì)在NP-HPLC流動相中難保留的缺點，使待分析物和樣品基質(zhì)在流動相中的溶解度得以提高。典型的HILIC流動相構(gòu)成是水或者揮發(fā)性緩沖鹽溶液以及40–97％的乙腈，使得樣品在質(zhì)譜中的電離更具傳導(dǎo)性。

目前分析高粱中的原花青素組成以正相為主，其流動相不利于環(huán)保；另外，對于釀酒用高粱中單寧的檢測僅限于總量的比色測定，比色法誤差較大。

發(fā)明內(nèi)容