[發明專利]一種檢測LGG的電化學免疫傳感器及其制備和使用方法

有效

• 申請號: 202010517838.3
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111812174B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 高亞軍;獨倚天;楊飛宇;王嘉敏;楊占軍;楊振泉
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

本發明公開了一種檢測LGG的電化學免疫傳感器及其制備和使用方法，該傳感器，包括電極和包覆在電極上的Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖復合材料，其制備方法包括：(S1)電極預處理；(S2)制備Cu@Cu₂O?BNDC；(S3)制備Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖溶液；(S4)制備Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖復合電極；(S5)將LGG抗體滴加到Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖復合電極上，并用血清白蛋白溶液阻斷其非特異性結合位點，用緩沖溶液洗滌后，得到檢測LGG的電化學免疫傳感器；其使用方法包括：(1)檢測LGG的電化學免疫傳感器電化學行為測試；(2)實際樣品的測量。該免疫傳感器體積小，便于使用，在檢測LGG時靈敏度高、抗干擾性強、檢測時間短；其制備步驟簡單、成本低廉。

技術領域

本發明涉及一種電化學免疫傳感器及其制備和使用方法，更具體地，涉及一種檢測LGG的電化學免疫傳感器及其制備和使用方法。

背景技術

鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosus）是一種重要的益生菌，上世紀80年代由美國科學家Gorbach和Goldin首次從健康人群的腸道中分離而得，具有保持腸道微生態平衡，抑制有害細菌生長，消除過敏等生理功能。電流型無標記免疫分析方法基于抗原抗體的特異性結合，在電極表面形成的免疫復合物阻礙電化學活性探針與電極之間的電子傳輸，從而引起電活性物質峰電流下降，利用這種電流的變化可實現LGG的定量檢測。但是，現有傳統的電化學探針應用于無標記電化學免疫傳感，存在傳感器的檢測靈敏度不高等缺點，未能在LGG檢測上充分發揮電流型無標記免疫分析方法高靈敏度檢測的優勢。

發明內容

發明目的：本發明的目的是提供一種操作簡單、成本低、靈敏度高的檢測LGG的電化學免疫傳感器，本發明的另一目的是提供該免疫傳感器的制備方法，本發明的又一目的是提供該免疫傳感器的使用方法。

技術方案：本發明所述一種檢測LGG的電化學免疫傳感器，包括電極和包覆在電極上的Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖復合材料。

其中，電極為玻碳電極。

本發明所述的檢測LGG的電化學免疫傳感器的制備方法，包括以下步驟：

（S1）電極預處理；

（S2）將Cu（NO₃）₂溶液與苯胺溶液、過硫酸銨溶液混合，然后進行干燥、碳化，制得Cu@Cu₂O?BNDC；

（S3）將Cu@Cu₂O?BNDC分散在殼聚糖溶液中制得Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖溶液；

（S4）將Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖溶液滴加在預處理的電極上得到Cu@Cu₂O ?BNDC?殼聚糖復合電極；

（S5）將LGG 抗體滴加到Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖復合電極上，并用血清白蛋白溶液阻斷其非特異性結合位點，用緩沖溶液洗滌后，得到檢測LGG的電化學免疫傳感器。

其中，步驟S2中苯胺溶液、Cu（NO₃）₂溶液與過硫酸銨溶液的摩爾比為3~7：5：4~6；并且先將苯胺和過硫酸銨分別溶于硼酸；碳化過程在惰性氣體中，溫度為800~1000℃，時間為2~3h；步驟S4中LGG 抗體濃度為80~120 μgmL^?1L。

本發明所述的檢測LGG的電化學免疫傳感器的使用方法，包括以下步驟：