[發(fā)明專利]一種檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器及其制備和使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010517838.3
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111812174B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高亞軍;獨倚天;楊飛宇;王嘉敏;楊占軍;楊振泉
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學(xué)
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，包括電極和包覆在電極上的Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖復(fù)合材料，所述電極上還修飾有特異性識別LGG的多克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，所述電極為玻碳電極。

3.一種權(quán)利要求1所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（S1）電極預(yù)處理；

（S2）將Cu（NO₃）₂溶液與苯胺溶液、過硫酸銨溶液混合，然后進(jìn)行干燥、碳化，制得Cu@Cu₂O?BNDC；所述苯胺溶液、過硫酸銨溶液中使用的溶劑為硼酸；

（S3）將Cu@Cu₂O?BNDC分散在殼聚糖溶液中制得Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖溶液；

（S4）將Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖溶液滴加在預(yù)處理的電極上得到Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖復(fù)合電極；

（S5）將LGG 抗體滴加到Cu@Cu₂O?BNDC?殼聚糖復(fù)合電極上，并用血清白蛋白溶液阻斷其非特異性結(jié)合位點，用緩沖溶液洗滌后，得到檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中苯胺溶液、Cu(NO₃)₂溶液與過硫酸銨溶液的摩爾比為3~7：5：4~6。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中先將苯胺和過硫酸銨分別溶于硼酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中碳化過程在惰性氣體中，溫度為750~1000℃，時間為2~4h。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟S4中LGG 抗體濃度為90~110 μg/mL。

8.一種權(quán)利要求1所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器電化學(xué)行為測試：將LGG抗原滴加到檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器上作為工作電極，與參比電極和輔助電極構(gòu)成三電極體系，在含有[Fe(CN)₆]^3?/4?的PBS緩沖溶液中采用差分脈沖伏安法進(jìn)行電化學(xué)測量，得出該電化學(xué)免疫傳感器對LGG的擬合線性回歸方程及檢出限；

（2）實際樣品的測量：將處理好的待測樣品滴加到檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器上作為工作電極，與參比電極和輔助電極構(gòu)成三電極體系，進(jìn)行電化學(xué)測量，并利用步驟1中的擬合線性回歸方程即可計算出待檢測樣品中LGG的濃度。

9.根據(jù)權(quán)利要求8中的所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器的使用方法，其特征在于，其所述步驟（1）中LGG抗原濃度為10²?10⁸ CFU/mL。

10.根據(jù)權(quán)利要求9中的所述的檢測LGG的電化學(xué)免疫傳感器的使用方法，其特征在于，所述參比電極和輔助電極分別為甘汞電極和鉑絲電極。