[發明專利]一種從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法

在審

• 申請號: 202010517373.1
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111662901A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 梁偉能;賴鑫勇;梁偉滔
• 申請（專利權）人: 佛山市博朋生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州恒華智信知識產權代理事務所(普通合伙) 44299
• 代理人: 張建明

1.一種從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)獲取動物低核酸含量樣品；

(2)低核酸含量樣品的保護處理，對低核酸含量樣品添加樣品電荷平衡液，得到樣品混合液；

(3)樣品混合液的離心處理，對樣品混合液中加入納米磁珠，進行離心處理，得到磁珠混合液；

(4)去除所述磁珠混合液上部的上清液，取所述磁珠混合液下部包含納米磁珠的沉淀部分作為待提取液待用；

(5)通過自動核酸提取儀對所述待提取液進行核酸提取，得到病毒核酸。

2.根據權利要求1所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：所述低核酸含量樣品為鼻咽拭子樣品、咬繩唾液樣品和環境樣品。

3.根據權利要求1所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：所述步驟(2)中的電荷平衡液為包含抗生素的PBS溶液。

4.根據權利要求3所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：1L所述電荷平衡液中包含磷酸二氫鉀0.20-0.4g，磷酸氫二鈉1.2-1.8g，氯化鈉8-10g，氯化鉀0.2-0.4g。

5.根據權利要求4所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：所述抗生素包括青霉素、鏈霉素和制霉菌素，所述青霉素在所述電荷平衡液中的濃度為2000IU/mL、所述鏈霉素在所述電荷平衡液中的濃度為2mg/mL，所述制霉菌素在所述電荷平衡液中的濃度為1000IU/mL。

6.根據權利要求5所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：所述電荷平衡液由經滅菌的稀鹽酸調至pH7.2—7.4。

7.根據權利要求3所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：所述步驟(3)中加入的納米磁珠直徑為10-15納米。

8.根據權利要求3所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：步驟(4)中去除的上清液在所述磁珠混合液的占比大于等于四分之三，包含納米磁珠沉淀部分的待提取液在所述磁珠混合液的占比小于等于四分之一。

9.根據權利要求3所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：所述步驟(5)中使用的核酸提取試劑盒為六個孔試劑盒，依次包括磁珠孔、裂解液孔、第一漂洗液孔、第二漂洗液孔、隔離孔和洗脫液孔。

10.根據權利要求9所述的從動物低核酸含量樣品中提取病毒核酸的方法，其特征在于：所述六個孔試劑盒的裂解液孔中含有裂解液，裂解液組成包括3-6M鹽酸胍、1％-4％曲拉通—100、1.5％壬基酚聚氧乙烯醚、2％吐溫-20、18mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸、1.8mM乙二胺四乙酸、蛋白酶K20IU；其中所述蛋白酶K20IU外置，使用時加入。