[發(fā)明專利]一種復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010517329.0
• 申請日: 2020-06-09
• 公開（公告）號: CN111603569A
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃念;凌昌全;李威;王麗娜;杜娟;何煜宇;干正;王曼;阮亦;賀海威;茍浩;董霞;陶萬茹;黃勇
• 申請（專利權(quán)）人: 上海長海醫(yī)院
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/68;A61K31/585;A61K38/17;A61P1/16;A61P35/00
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 李陽

1.一種復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體，其特征在于，是由巰基化的抗體、Mal-PEG₂₀₀₀-DSPE與蟾毒靈和蜂毒素在液相環(huán)境中自組裝形成的，具有如下的結(jié)構(gòu)：

mAb-Mal-PEG₂₀₀₀-DSPE-[(Bufalin)_m-(Melittin)_n]_{脂質(zhì)體}

其中，mAb為單克隆抗體Her1、Her2、CD20或CD40；Mal-PEG₂₀₀₀-DSPE為馬來酰亞胺-聚乙二醇2000-磷脂酰乙醇胺，Bufalin為蟾毒靈，Melittin為蜂毒素，m和n分別為偶聯(lián)上的蟾毒靈和蜂毒素的分子數(shù)目，n值為1-80，m為1-16；所述脂質(zhì)體為球狀雙層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)，疏水性的蟾毒靈包裹在疏水的外層脂質(zhì)層中，親水性蜂毒素包裹在親水的脂質(zhì)體內(nèi)囊中，單克隆抗體則與Mal-PEG₂₀₀₀-DSPE鏈接在最外層；所述每個脂質(zhì)體中蟾毒靈和蜂毒素的分子數(shù)目為1-10000。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體，其特征在于，所述的脂質(zhì)體中mAb和Mal-PEG₂₀₀₀-DSPE的摩爾比為1:10。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體，其特征在于，所述的脂質(zhì)體中蟾毒靈和蜂毒素的摩爾比為1:5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體粒徑大小為20-1000nm。

5.一種如權(quán)利要求1-4任一所述的復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

首先，將蟾毒靈、膽固醇、DOPC、DSPC、Mal-PEG₂₀₀₀-DSPE、維生素E，溶于氯仿后，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法制備脂質(zhì)薄膜；其次，將溶解有蜂毒素的PBS與脂質(zhì)薄膜進(jìn)行混勻水浴并超聲；接著，利用脂質(zhì)體均質(zhì)儀和聚碳酸酯膜對脂質(zhì)體的粒徑進(jìn)行控制，將部分多室脂質(zhì)體加壓擠出為單室脂質(zhì)體；最后，將擠壓后的脂質(zhì)體和巰基化抗體混合后，在室溫下避光孵育2h，從而制備出，外殼連有親水性抗體的復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括以下步驟：

(A)將蟾毒靈、膽固醇、DOPC、DSPC、Mal-PEG₂₀₀₀-DSPE、維生素E，溶于氯仿后，室溫下避光攪拌反應(yīng)2h；

(B)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使成膜材料在圓底燒瓶底部形成一層均勻薄膜；所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的條件為：轉(zhuǎn)速40rpm，溫度37℃，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時間為12h，氮氣流速為10mL/min；

(C)圓底燒瓶中加入含有蜂毒素的水合介質(zhì)后，混勻水浴并超聲，即得復(fù)方中藥脂質(zhì)體；所述水合的條件為：油水比1:2，超聲時間20min，水合溫度45℃，水合時間40min；

(D)選用脂質(zhì)體均質(zhì)儀和聚碳酸酯膜來對脂質(zhì)體的粒徑進(jìn)行控制，將部分多室脂質(zhì)體加壓擠出為單室脂質(zhì)體；

(E)用2-亞氨基硫烷鹽酸鹽與抗體在pH＝7.4的PBS下反應(yīng)，將抗體進(jìn)行巰基化；所述抗體為Her1、Her2、CD20或CD40；

(F)接取l mL擠壓后的脂質(zhì)體和巰基化抗體混合后，巰基化抗體與Mal-PEG₂₀₀₀-DSPE的摩爾比為l:10，緩慢進(jìn)行，在室溫下避光孵育2h，慢攪拌；攪拌速度為50-1000rpm。

7.一種如權(quán)利要求1-4任一所述的復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體在制備肝癌治療藥物中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)方中藥免疫脂質(zhì)體在制備肝癌治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的肝癌為索拉非尼耐藥肝癌。