[發明專利]UGT3A2基因及其編碼的蛋白在上消化道腫瘤輔助診斷中的應用

有效

• 申請號: 202010514159.0
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111593124B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 宋昕;靳艷;王立東;趙學科;王盼盼;楊媛嘖;范宗民;韓雪娜;王苒;李貝;秦艷茹;李秀敏;陳志國
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫院;新鄉醫學院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574;G01N33/573;A61K45/00;A61P35/00;C12N15/113;C12N15/867;C12N15/90;C12N5/10;C12R1/91
• 代理公司: 鄭州翊博專利代理事務所(普通合伙) 41155
• 代理人: 周玉青;付紅莉

1.UGT3A2基因或其編碼蛋白的表達水平的檢測試劑在制備用于上消化道腫瘤輔助診斷產品中的應用，所述上消化道腫瘤為食管鱗癌、賁門腺癌或胃腺癌。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述產品通過逆轉錄PCR、實時定量PCR、原位雜交、Northern blotting、芯片、高通量測序平臺、免疫組織化學染色或酶聯免疫吸附檢測樣本中UGT3A2基因的表達水平。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述產品中含有擴增UGT3A2基因的特異性引物、與UGT3A2基因核苷酸序列雜交的探針或與UGT3A2蛋白特異性結合的抗體。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，擴增UGT3A2基因的特異性引物序列如SEQID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。

5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述產品為芯片、制劑或試劑盒；所述樣本為組織、血清或細胞。

6.UGT3A2基因表達水平的抑制劑在制備治療食管鱗癌的藥物中的應用。

7.UGT3A2基因表達水平的抑制劑在制備抑制胃腺癌中細胞的增殖、侵襲能力的藥物中的應用。

8.根據權利要求6或7所述的應用，其特征在于，所述UGT3A2基因的表達抑制劑包括特異靶向UGT3A2基因的sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.5任一所示。

9.一種穩定敲除UGT3A2基因的食管鱗癌細胞系TE1，所述穩定敲除UGT3A2基因的食管鱗癌細胞系TE1的構建方法包括以下步驟：

（1）在權利要求8所述的sgRNA的5'端加上CACCG得到正向寡核苷酸，根據在sgRNA核苷酸序列合成sgRNA的DNA互補鏈，并在DNA互補鏈的5'端加上AAAC得到反向寡核苷酸，將正向寡核苷酸和反向寡核苷酸變性、退火、形成雙鏈；

（2）將步驟（1）制備的雙鏈與Cas9載體連接，得到Cas9單載體質粒；

（3）將步驟（2）制備的Cas9單載體質粒進行慢病毒包裝及檢測，獲得慢病毒重組表達載體；

（4）將步驟（3）制備的慢病毒重組表達載體在體外感染食管鱗癌細胞系TE1，篩選穩轉細胞，獲得穩定敲除UGT3A2基因的食管鱗癌細胞系TE1。