[發明專利]適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202010513099.0
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111607590B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 朱羅羅;韓巧玲
• 申請（專利權）人: 申翌生物科技（杭州）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

本發明提供一種適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取方法及試劑盒，提取試劑盒含有裂解結合液、磁珠溶液、消化酶、核酸釋放劑、洗滌液、緩沖液。與常規的病毒核酸提取方法相比較，本方法操作步驟簡單、安全，一次性加入裂解結合液和磁珠等組分，實現了裂解和結合同時進行，可以達到DNA和RNA共提；根據后續實驗需要，可選擇性保留DNA和/或RNA，且抑制物質殘留少。試劑盒可采用預分裝方式，結合核酸自動提取儀使用，整個流程下來僅需40min左右；無氯仿苯酚等有毒試劑。

技術領域

本發明涉及核酸提取領域，特別涉及一種適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取方法及試劑盒。

背景技術

隨著分子生物學技術的興起與發展，基因組學和蛋白組學逐漸成為研究的熱點。基因組水平的研究對于遺傳發育、流行病檢測、病理變化、生理變化、微生物鑒別診斷等多領域都有著重要影響。基因測序和分子診斷作為分子生物學的重要應用分支，與傳統疾病診斷方法相比有著不可替代的優勢，合理的樣本保存和提取是研究的重要基礎保障，對后續的檢測分析有重要影響。

血液是人體重要的體液組成部分，與人的生理和病理變化密切相關，常被用來進行相關疾病的診斷。隨著分子生物學在分子診斷領域的廣泛應用，血液除用于血常規檢測外，正逐漸用于疾病的預測和遺傳學分析。作為研究的基礎，穩定的核酸提取對于基因組學研究是十分重要的。傳統的血液提取核酸的方法有很多種類型，如酚氯仿抽提法、鹽酸胍裂解過柱法、氯化鈉沉淀法等。

比如中國專利CN 106906207A公開了一種核酸提取試劑方法，利用Gu-HCl、Tris-HCl、EDTA、異丙醇、SDS、Triton-100、β-巰基乙醇和檸檬酸鈉進行裂解吸附，LiCl、NaCl、MOPS、乙醇等進行洗脫；中國專利申請CN 106867992A公開了一種全血DNA提取方法，裂解液包括異硫氰酸胍、碘化鋰、檸檬酸三鈉、Tween 20，洗滌液包括異硫氰酸胍、Tris-HCl、NaCl和無水乙醇，此類方法需要依靠高濃度的胍鹽進行裂解，低溫時容易結晶，還需要異丙醇、無水乙醇等試劑配合使用，操作程序復雜繁瑣。

中國專利CN 104611324A公開了一種全血樣本快速裂解試劑盒及其檢測方法，裂解液由月桂酰基肌氨酸鈉、二硫蘇糖醇、TE組成，高溫裂解后高速離心用于核酸檢測。此方法快速簡便，但由于血液成分復雜，粗提取方法會影響到核酸提取純度和產量，對低濃度的樣本的應用效果也較差，也難以后續長時間保存核酸。

中國專利申請CN104560959A公開了一種飽和氯化鈉法快速批量提取血液DNA的試劑盒及方法，該方法以氯化鈉為蛋白沉淀液，需要冷凍和高溫等多個步驟，操作復雜，耗時長，且產物難以干凈去除鹽離子。

換言之，目前雖然有各式各樣的核酸提取方法，但均存在著或多或少的技術缺陷亟待解決。

發明內容

本發明的目的在于提供一種適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取方法及試劑盒，無需高濃度胍鹽，通過裂解液和核酸釋放劑來釋放核酸，操作簡單；可以采用不同的清洗步驟來獲取DNA和RNA；通過與磁珠結合，實現快速高效全血核酸提取，且試劑盒中的提取試劑預分裝于深孔板，配合核酸提取儀使用即可可實現全自動核酸提取，使用時只需加入適量樣本，放入儀器即可自動完成核酸的提取純化。

本發明的目的在于提供一種適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取試劑盒，該試劑盒與市面現有試劑盒相比組分簡單，試劑毒性小、污染小，核酸提取效率高，無需復雜操作即可獲取DNA、RNA核酸。

本發明的目的在于提供一種適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取方法，該磁珠法全血提取方法操作步驟簡單、安全，一次性加入裂解結合液和磁珠等組分，實現了裂解和結合同時進行，可以達到DNA和RNA共提；根據后續實驗需要，可選擇性保留DNA和/或RNA，且抑制物質殘留少。試劑盒可采用預分裝方式，結合核酸自動提取儀使用，整個流程下來僅需40min左右；無氯仿苯酚等有毒試劑。