[發明專利]適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202010513099.0
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111607590B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 朱羅羅;韓巧玲
• 申請（專利權）人: 申翌生物科技（杭州）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

1.一種適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取試劑盒，其特征在于，包括以下試劑：

裂解結合液，其中裂解結合液由50mM GuSCN，25mM Tris-HCl、10 mM EDTA、1.5 MNaCl、質量百分比濃度為5%的PEG8000、質量百分比濃度為3%的Triton X-100組成；

磁珠溶液，其中磁珠溶液包括磁珠和緩沖液；

消化酶；

核酸釋放劑；

第一洗滌液，其中第一洗滌液包括1.5M NaCl，3% PEG8000，35％乙醇；

第二洗滌液，其中第二洗滌液包括100mMTris-HCI、10 mM EDTA、質量百分比濃度為3%的Triton X-100、3 M NaCI、75%乙醇；

第四洗滌液，其中第四洗滌液包括100 mM Tris-HCI、10 mM EDTA；

洗脫液，其中洗脫液包括25 mM Tris-HCI、10 mM EDTA。

2.根據權利要求1所述的適用于全血，血清或血漿的磁珠法核酸提取試劑盒，其特征在于，試劑盒中的試劑采用預分裝的形式。

3.根據權利要求1所述的適用于全血，血清或血漿的磁珠法核酸提取試劑盒，其特征在于，磁珠為硅羥基或羧基修飾的磁珠，消化酶選擇蛋白酶K。

4.一種適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

取裂解結合液，磁珠溶液，消化酶溶液以及核酸釋放劑，加入檢測樣本后混勻離心，得到混合溶液；將混合溶液置于消化酶對應的適宜溫度下同時進行裂解和磁珠吸附，得到磁珠吸附核酸溶液；往磁珠吸附核酸溶液中添加洗滌液進行純化處理，得到純化核酸溶液；往純化核酸溶液中加入洗脫液，得到純化核酸；其中檢測樣本為全血或血清或血漿樣本，其中裂解結合液由50mM GuSCN，25mM Tris-HCl、10 mM EDTA、1.5 M NaCl、質量百分比濃度為5%的PEG8000、質量百分比濃度為3%的Triton X-100組成；

洗滌液包括第一洗滌液、第二洗滌液以及第四洗滌液，其中第一洗滌液包括1.5MNaCl，3% PEG8000，35％乙醇，其中第二洗滌液包括100mMTris-HCI、10 mM EDTA、質量百分比濃度為3%的Triton X-100、3 M NaCI、75%乙醇，其中第四洗滌液包括100 mM Tris-HCI、10 mM EDTA，其中洗脫液包括25 mM Tris-HCI、10 mM EDTA。

5.根據權利要求4所述的一種適用于全血、血清或血漿的磁珠法核酸提取方法，其特征在于，往磁珠吸附核酸溶液中添加第一洗滌液后震蕩混勻并置于磁力架上靜置1-3min，加入第二洗滌液后震蕩混勻并置于磁力架上靜置1-3min，磁珠完全吸附后吸棄液體，加入第四洗滌液后震蕩混勻并置于磁力架上靜置1-3min，磁珠完全吸附后吸棄溶液。