[發明專利]利用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法

在審

• 申請號: 202010512149.3
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111492980A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 莫昭展;盧娟;林桂安;蘇建睦
• 申請（專利權）人: 玉林師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟;馬赟齋

本發明公開了一種利用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，以羅漢松的嫁接苗的萌發芽條為外植體，消毒后接種于誘導培養基中進行初始芽誘導培養至萌芽即得羅漢松初始芽。本發明以羅漢松的嫁接苗的萌發芽條為外植體，幼態化程度高，極大地提高了外植體的有效性，初始芽發生率高，芽苗伸長快、活力旺盛，且一致性高，為優質種源、優良單株的大規模推廣，取得較高的遺傳增益，保證后代的生長相對一致打下基礎，具有較好的經濟效益和社會效益。

技術領域

本發明涉及植物組織培養方法，具體涉及利用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法。

背景技術

羅漢松(學名：Podocarpus macrophyllus(Thunb.)D.Don)，別名土杉，羅漢松科，羅漢松屬常綠針葉喬木，高達20m，胸徑達60cm，花期4-5月，種子8-9月成熟。羅漢松產于中國江蘇、浙江、福建、安徽、江西、湖南、四川、云南、貴州、廣西、廣東等省區，日本也有分布。材質細致均勻，易加工，可作家具、器具、文具及農具等用。

羅漢松屬針葉樹種，該植物具有多種藥用價值，如葉子可以用于止血，治療跌打損傷；根皮能抑菌殺蟲、止痛活血，外用疥瘡、風濕骨痛；種子性溫熱，具有滋養脾胃、補中益氣的功能。目前，學者們己從羅漢松的各個部位分離鑒定出多種化學成分，包括二菇,降二菇雙內酷、黃酮、甾體等。生物活性研究表明這些化合物具有不同程度的殺蟲、昆蟲拒食、抑菌、抗氧化、抗腫瘤等活性，其中二菇類化合物表現尤為出。

目前，羅漢松主要繁殖方式是播種、扦插。不能最大限度地提高遺傳改良增益，嚴重限制了羅漢松優良無性系的推廣與應用。植物組培技術的使用，是實現羅漢松優良無性系苗木快速繁育的有效途徑，加快優良種源的推廣應用。目前，國內外尚未有羅漢松組織培養技術的報道。

發明內容

本發明針對羅漢松目前的主要繁殖方式是播種和扦插，無法充分利用優質種源、優良單株，保證較高的遺傳增益，后代易產生變異，生長的一致性差等技術問題，提供一種利用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，為優質種源、優良單株的大規模推廣，取得較高的遺傳增益，保證后代的生長相對一致打下基礎。

本發明提供的技術方案為：一種利用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，以羅漢松的嫁接苗的萌發芽條為外植體，消毒后接種于誘導培養基中進行初始芽誘導培養至萌芽即得生長健壯、活力旺盛的羅漢松初始芽，所述的誘導培養基為：WPM培養基+0.5-2.0mg/L ZT+1.0-3.0mg/L KT+3.0-4.5g/L蔗糖+3.0-4.0g/L瓊脂+0.1-0.3％廣譜殺菌劑。

所述誘導培養基為發明人改良后的WPM培養基，其包含以下組分：412.5mg/L硝酸銨、400mg/L硝酸鉀、96mg/L二水氯化鈣、278mg/L四水硝酸鈣、370mg/L硫酸鎂、900mg/L硫酸鉀和340mg/L磷酸二氫鉀；22.3mg/L硫酸錳、8.6mg/L硫酸鋅、0.025mg/L硫酸銅、0.25mg/L鉬酸鈉和6.2mg/L硼酸；37.3mg/L乙二胺四乙酸二鈉和27.8mg/L硫酸亞鐵；0.5mg/L煙酸、0.5mg/L鹽酸硫胺素、0.5mg/L鹽酸毗哆醇、l00mg/L肌醇和2mg/L甘氨酸。

所述羅漢松的嫁接苗的萌發芽條通過以下方式獲?。阂砸荒晟牧_漢松實生苗為砧木，選擇羅漢松母樹當年新抽嫩梢作為接穗，嫁接，成活后剪掉嫁接苗主梢促芽生長，選取3.0-5.0cm長萌芽條為外植體。進一步地，待萌芽條達到3.0-5.0cm長時，用常規方法噴施殺菌劑，1-2日后于晴好天氣采下活力旺盛，長為3.0-5.0cm的長萌芽條作為外植體備用。

本發明中，接穗從成年優良羅漢松母樹剪下后，用濕毛巾包好后放入裝有冰袋的保溫箱中帶回置于4℃冰箱冷藏，在24h內完成嫁接。