[發明專利]利用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法

在審

• 申請號: 202010512149.3
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111492980A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 莫昭展;盧娟;林桂安;蘇建睦
• 申請（專利權）人: 玉林師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟;馬赟齋

1.一種利用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，以羅漢松的嫁接苗的萌發芽條為外植體，消毒后接種于誘導培養基中進行初始芽誘導培養至萌芽即得羅漢松初始芽。

2.根據權利要求1所述的用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，所述的誘導培養基為：WPM培養基+0.5-2.0mg/L ZT+1.0-3.0mg/L KT+3.0-4.5g/L蔗糖+3.0-4.0g/L瓊脂+0.1-0.3％廣譜殺菌劑。

3.根據權利要求2所述的用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，所述WPM培養基，其包含以下組分：412.5mg/L硝酸銨、400mg/L硝酸鉀、96mg/L二水氯化鈣、278mg/L四水硝酸鈣、370mg/L硫酸鎂、900mg/L硫酸鉀和340mg/L磷酸二氫鉀；22.3mg/L硫酸錳、8.6mg/L硫酸鋅、0.025mg/L硫酸銅、0.25mg/L鉬酸鈉和6.2mg/L硼酸；37.3mg/L乙二胺四乙酸二鈉和27.8mg/L硫酸亞鐵；0.5mg/L煙酸、0.5mg/L鹽酸硫胺素、0.5mg/L鹽酸毗哆醇、l00mg/L肌醇和2mg/L甘氨酸。

4.根據權利要求1或2或3所述的用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，所述羅漢松的嫁接苗的萌發芽條通過以下方式獲取：以一年生的羅漢松實生苗為砧木，選擇羅漢松母樹當年新抽嫩梢作為接穗，嫁接，成活后剪掉嫁接苗主梢促芽生長，選取3.0-5.0cm長萌芽條為外植體。

5.根據權利要求4所述的用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，待萌芽條達到3.0-5.0cm長時，噴施殺菌劑，1-2日后于晴好天氣采下活力旺盛，長為3.0-5.0cm的長萌芽條作為外植體備用。

6.根據權利要求4所述的用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，接穗從成年優良羅漢松母樹剪下后，用濕毛巾包好后放入裝有冰袋的保溫箱中帶回置于4℃冰箱冷藏，在24h內完成嫁接。

7.根據權利要求4所述的用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，外植體消毒處理：將外植體用無菌水沖洗干凈后，將其置于體積濃度為75％酒精中浸泡3-5min，取出放于體積濃度為添加5-10滴吐溫的10-25％的雙氧水溶液中攪拌浸泡20-30min后，取出外植體放入體積濃度為0.3-0.5％的廣譜殺菌劑中浸泡30-60min，最后用無菌水洗5-7次，每次沖洗3-6min。

8.根據權利要求4所述的用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，培養條件均為：培養溫度為23～25℃，光照強度為800～1000lx，光照時間為14～16小時/天，濕度60％-70％。

9.根據權利要求4所述的用羅漢松無菌外植體誘導初始芽的方法，其特征是，所述初始芽誘導培養周期為70-90天。