[發明專利]一種利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法

有效

• 申請號: 202010512037.8
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111650167B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 張幸;李昺之;陳月;林蕾;夏安琪;張世林;鎖緹瑩
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

本發明公開了一種利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法，將分裂適配體與納米簇信標相融合制備AgNCs?Apt1，將AgNCs?Apt1溶液、富含鳥嘌呤增強子序列的GRS?Apt2溶液、含有不同濃度目標物的樣品分別與Tris?HCl緩沖液混合反應，記錄發射波長下所得樣品的熒光強度；繪制關系曲線圖，計算目標物分子的濃度與熒光強度之間的關系式；利用關系式計算待測血清樣品中的目標物分子濃度。由于銀納米簇具有可調的熒光特性以及分裂適配體對目標物的特異性識別，該傳感器可以實現對多種目標物的特異性檢測，通過改變適配體序列，可以拓寬該策略的應用范圍。本發明具有免標記，無酶，靈敏度高的優點，能夠靈敏的檢測出生物樣品中的目標物含量。

技術領域

本發明涉及一種生物傳感器，具體為一種利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法。

背景技術

通過指數富集配體系統進化(systematic evolution of ligands byexponentialenrichment，SELEX)技術可以在眾多核酸序列中篩選出與目標物具有高親和力的核酸適配體序列，由于這種特異性的識別我們可以檢測多種目標物分子，包括小分子氨基酸到大分子蛋白等。在生物傳感分析領域中，多數是基于競爭性結合的檢測策略，但是這種策略存在著非特異性的干擾，降低最終結果的準確性。根據報道，一些適體可以被分裂成多條短片段，這些短片段仍具有特異性識別目標物的能力。當加入目標檢測物時，這些被分裂的適體片段與目標物形成一種夾心型的復合物，這種復合物不會引起構象的改變，可以有效地克服完整適體識別的缺點。

分裂適配體以被廣泛應用于構建熒光、比色以及電化學的適體傳感領域中。其中基于分裂適體的熒光傳感方法具有高靈敏性、便攜性以及簡易性等優點，但是這種策略往往需要在雙鏈DNA中嵌入具有毒性的熒光染料，所以會產生毒性的擔憂。或者是基于依賴于距離的熒光法進行表征，這類方法相對而言可以簡化檢測步驟以及避免使用帶有毒性的熒光染料。DNA-銀納米簇是一種具有高度光穩定性、低毒性以及合成簡單等優點的熒光納米材料。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用增強檢測的靈敏度和準確度的包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物濃度的方法。

具體地，本發明的一種利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法，具體包括如下步驟：

a)制備DNA-銀納米簇信標AgNCs-Apt1：將目標物分子的納米簇信標模板即分裂適配體1Apt1溶解于Tris-HCl緩沖液中，加熱至90-95℃，維持5-15min后迅速轉移至冰水浴中，隨后加入硝酸銀溶液，渦旋混合后避光20-25℃下反應20-40min，接著，迅速加入硼氫化鈉溶液，充分振搖混合過夜；目標物分子為腺苷、可卡因、17β-雌二醇、凝血酶中的一種；

b)將1體積的AgNCs-Apt1溶液、1體積的富含鳥嘌呤增強子序列的分裂適配體2GRS-Apt2溶液、2體積含有不同濃度目標物的樣品分別與6體積的Tris-HCl緩沖液混合反應；